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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Agricultura Digital. |
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Data corrente: |
30/09/2019 |
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Data da última atualização: |
07/01/2020 |
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Tipo da produção científica: |
Orientação de Tese de Pós-Graduação |
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Autoria: |
DE VECCHI, R. |
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Afiliação: |
RODRIGO DE VECCHI, IB/Unicamp. |
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Título: |
Caracterização de atividade funcional e expressão gênica de neurônios sensoriais periféricos humanos gerados a partir de células-tronco de pluripotência induzida para uso em modelos pré-clínicos in vitro. |
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Ano de publicação: |
2018 |
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Fonte/Imprenta: |
2018. |
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Páginas: |
123 p. |
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Idioma: |
Português |
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Notas: |
Tese (Doutorado em Genética e Biologia Molecular) - Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas. Orientador: Felipe Rodrigues da Silva. |
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Conteúdo: |
RESUMO. Células-tronco humanas de pluripotência induzida (hiPSC) são capazes de se diferenciar em vários tipos celulares durante o desenvolvimento embrionário, incluindo subtipos de neurônios sensoriais periféricos (PSNs). No entanto, a maior parte dos estudos que mostram a geração de PSNs a partir de hiPSCs não demonstra uma funcionalidade robusta dos PSNs obtidos in vitro. Além disso, a dificuldade na obtenção de neurônios humanos limita a utilização destas células em modelos pré-clínicos in vitro de doenças. Neste trabalho, hiPSCs foram diferenciadas em células progenitoras de crista neural (NCPCs) utilizando um protocolo de diferenciação pré-estabelecido. Essas NCPCs foram tratadas com meio de indução neuronal até completa diferenciação em PSNs. Durante o período de maturação neuronal, os PSNs obtidos foram cultivados na presença ou ausência de meio condicionado de queratinócitos epidérmicos humanos (HEK-CM) e seu perfil transcricional foi determinado por RNA-Seq. A análise transcriptômica dos marcadores neuronais expressos indicou uma predominância de mecanoceptores do tipo C de baixo limiar (C-LTMR) em cultura. O perfil transcricional dos PSNs obtidos apresentou maior correlação com tecidos do sistema nervoso, quando comparado a tecidos cutâneos, considerando que as hiPSCs foram reprogramadas a partir de fibroblastos dermais. A expressão de marcadores neuronais específicos foi confirmada por imunofluorescência e o crescimento de neuritos indicou aumento da maturação neuronal após tratamento com HEK-CM. Os PSNs foram responsivos a agonistas e antagonistas de TRPV1 e CB1, e a liberação de Substância P (SP) foi demonstrada pela primeira vez neste subtipo neuronal humano obtido in vitro. Os resultados sugerem uma funcionalidade celular suficiente para a utilização desses PSNs em modelos pré-clínicos in vitro estabelecidos e amplamente utilizados, como a epiderme humana reconstruída a partir de células humanas primárias, cuja implementação também foi descrita neste trabalho. A inclusão de neurônios humanos pode aumentar o poder preditivo de modelos tridimensionais e ampliar as possibilidades de estudo da morfogênese e regeneração tecidual para a triagem e descoberta de novos tratamentos. MenosRESUMO. Células-tronco humanas de pluripotência induzida (hiPSC) são capazes de se diferenciar em vários tipos celulares durante o desenvolvimento embrionário, incluindo subtipos de neurônios sensoriais periféricos (PSNs). No entanto, a maior parte dos estudos que mostram a geração de PSNs a partir de hiPSCs não demonstra uma funcionalidade robusta dos PSNs obtidos in vitro. Além disso, a dificuldade na obtenção de neurônios humanos limita a utilização destas células em modelos pré-clínicos in vitro de doenças. Neste trabalho, hiPSCs foram diferenciadas em células progenitoras de crista neural (NCPCs) utilizando um protocolo de diferenciação pré-estabelecido. Essas NCPCs foram tratadas com meio de indução neuronal até completa diferenciação em PSNs. Durante o período de maturação neuronal, os PSNs obtidos foram cultivados na presença ou ausência de meio condicionado de queratinócitos epidérmicos humanos (HEK-CM) e seu perfil transcricional foi determinado por RNA-Seq. A análise transcriptômica dos marcadores neuronais expressos indicou uma predominância de mecanoceptores do tipo C de baixo limiar (C-LTMR) em cultura. O perfil transcricional dos PSNs obtidos apresentou maior correlação com tecidos do sistema nervoso, quando comparado a tecidos cutâneos, considerando que as hiPSCs foram reprogramadas a partir de fibroblastos dermais. A expressão de marcadores neuronais específicos foi confirmada por imunofluorescência e o crescimento de neuritos indicou aumento da maturação ne... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Células receptoras sensoriais; Células tronco pluripotentes induzidas; Células-tronco humanas de pluripotência induzida; Crista neural; Human Epidermal Keratinocytes; Neural Crest Precursor Stem Cells; Neurônios Sensoriais Periféricos; Peripheral Sensory Neurons; Queratinócitos Epidérmicos Humanos; Receptor Vaniloide de Potencial Transitório 1; Sensory receptor cells; Substância P; Transient Receptor Potential Vanilloid 1. |
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Thesaurus Nal: |
Induced pluripotent stem cells; Keratinocytes; Neural crest; Substance P. |
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Categoria do assunto: |
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Agricultura Digital (CNPTIA) |
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| 1. |  | NUNES, R. H. da S.; MUNIZ, A. W.; KANO, C.; CARDOSO, M.; FASCIN, R.; SILVA, T. A. de C. da. Qualidade biológica do solo em cultivo mínimo de abobrinha em palhada de Flemingia sp. na Amazônia Ocidental. In: REUNIÃO BRASILEIRA DE MANEJO E CONSERVAÇÃO DO SOLO E DA ÁGUA, 19., 2012, Lages. Conservação do solo e da água no Brasil: preceitos e ações no ensino, na pesquisa e na extensão: anais. s.l.: SBCS, 2012. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Amazônia Ocidental. |
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