03709nam a2200337 a 450000100080000000500110000800800410001910000180006024502420007826000160032030000110033650001640034752022980051165000350280965000180284465000170286265000160287965300350289565300440293065300550297465300180302965300340304765300380308165300390311965300310315865300410318965300510323065300270328165300180330865300450332621125922020-01-07       2018    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aDE VECCHI, R.  aCaracterização de atividade funcional e expressão gênica de neurônios sensoriais periféricos humanos gerados a partir de células-tronco de pluripotência induzida para uso em modelos pré-clínicos in vitro.h[electronic resource]  a2018.c2018  a123 p.  aTese (Doutorado em Genética e Biologia Molecular) - Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas. Orientador: Felipe Rodrigues da Silva.  aRESUMO. Células-tronco humanas de pluripotência induzida (hiPSC) são capazes de se diferenciar em vários tipos celulares durante o desenvolvimento embrionário, incluindo subtipos de neurônios sensoriais periféricos (PSNs). No entanto, a maior parte dos estudos que mostram a geração de PSNs a partir de hiPSCs não demonstra uma funcionalidade robusta dos PSNs obtidos in vitro. Além disso, a dificuldade na obtenção de neurônios humanos limita a utilização destas células em modelos pré-clínicos in vitro de doenças. Neste trabalho, hiPSCs foram diferenciadas em células progenitoras de crista neural (NCPCs) utilizando um protocolo de diferenciação pré-estabelecido. Essas NCPCs foram tratadas com meio de indução neuronal até completa diferenciação em PSNs. Durante o período de maturação neuronal, os PSNs obtidos foram cultivados na presença ou ausência de meio condicionado de queratinócitos epidérmicos humanos (HEK-CM) e seu perfil transcricional foi determinado por RNA-Seq. A análise transcriptômica dos marcadores neuronais expressos indicou uma predominância de mecanoceptores do tipo C de baixo limiar (C-LTMR) em cultura. O perfil transcricional dos PSNs obtidos apresentou maior correlação com tecidos do sistema nervoso, quando comparado a tecidos cutâneos, considerando que as hiPSCs foram reprogramadas a partir de fibroblastos dermais. A expressão de marcadores neuronais específicos foi confirmada por imunofluorescência e o crescimento de neuritos indicou aumento da maturação neuronal após tratamento com HEK-CM. Os PSNs foram responsivos a agonistas e antagonistas de TRPV1 e CB1, e a liberação de Substância P (SP) foi demonstrada pela primeira vez neste subtipo neuronal humano obtido in vitro. Os resultados sugerem uma funcionalidade celular suficiente para a utilização desses PSNs em modelos pré-clínicos in vitro estabelecidos e amplamente utilizados, como a epiderme humana reconstruída a partir de células humanas primárias, cuja implementação também foi descrita neste trabalho. A inclusão de neurônios humanos pode aumentar o poder preditivo de modelos tridimensionais e ampliar as possibilidades de estudo da morfogênese e regeneração tecidual para a triagem e descoberta de novos tratamentos.  aInduced pluripotent stem cells  aKeratinocytes  aNeural crest  aSubstance P  aCélulas receptoras sensoriais  aCélulas tronco pluripotentes induzidas  aCélulas-tronco humanas de pluripotência induzida  aCrista neural  aHuman Epidermal Keratinocytes  aNeural Crest Precursor Stem Cells  aNeurônios Sensoriais Periféricos  aPeripheral Sensory Neurons  aQueratinócitos Epidérmicos Humanos  aReceptor Vaniloide de Potencial Transitório 1  aSensory receptor cells  aSubstância P  aTransient Receptor Potential Vanilloid 1