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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Soja. |
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Data corrente: |
31/07/2009 |
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Data da última atualização: |
05/06/2025 |
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Tipo da produção científica: |
Artigo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
ROLLA, A. A. P.; BENEVENTI, M. A.; FUGANTI, R.; MARIN, S. R. R.; FARIAS, J. R. B.; BINNECK, E.; ABDELNOOR, R. V.; NEPOMUCENO, A. L.; MARCELINO, F. C. |
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Afiliação: |
AMANDA A. PAIVA ROLLA, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE LONRINA; M. A. BENEVENTI, UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL; RENATA FUGANTI; SILVANA REGINA ROCKENBACH MARIN, CNPSO; JOSE RENATO BOUCAS FARIAS, CNPSO; ELISEU BINNECK, CNPSO; RICARDO VILELA ABDELNOOR, CNPSO; ALEXANDRE LIMA NEPOMUCENO, CNPSO; FRANCISMAR CORREA MARCELINO, CNPSO. |
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Título: |
Desenvolvimento e validação de um método de determinação do número de cópias de transgenes no genoma da soja por quantificação relativa por QPCR. |
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Ano de publicação: |
2009 |
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Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE SOJA, 5.; MERCOSOJA 2009, Goiânia. Anais... Londrina: Embrapa Soja, 2009. Seção trabalhos, t. 168. 1 CD-ROM. Editado por Adilson de Oliveira Júnior, Odilon Ferreira Saraiva, Clara Beatriz Hoffmann Campo, César de Castro. |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
A caracterização molecular de plantas geneticamente modificadas (PGMs) quanto ao número de cópias do transgene em seu genoma, bem como do sítio de inserção, permite inferir sobre a estabilidade do genoma receptor após a transformação gênica. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar a eficácia e exatidão da quantificação do número de cópias de transgenes no genoma da soja utilizando à metodologia de PCR quantitativo (qPCR), comparado a técnica pioneira de Southern blotting. Foram testados dois sistemas de quantificação por qPCR que empregam a quantificação relativa: o método do 2-∆∆Ct, previamente descrito para estudos de expressão gênica, e o apresentado neste trabalho que propõe a utilização da própria referência endógena, o gene lectina, com calibrador, sendo necessário o ajuste da fórmula para 2-∆Ct/2. Neste caso, como o gene lectina apresenta uma cópia por genoma haplóide, enquanto as plantas GM geradas são hemizigotas para cada lócus onde qual o transgene se inseriu, o resultado final de número de cópias do transgene comparado ao número de cópias do gene lectina deve ser divido por 2. A exatidão de cada sistema foi determinada por comparações com a técnica de Southern blotting. Quatro eventos PGM contendo o gene DREB1A, tiveram o número de cópias do transgene quantificados via qPCR por quantificação relativa. De acordo com os resultados três eventos tiveram o número de cópias dos cassetes determinados pelas duas metodologias de quantificação por qPCR e confirmados por Southern blotting. Somente um evento apresentou número de cópias superior por Southern blotting em relação ao qPCR. Os resultados demonstram a potencialidade da técnica na caracterização molecular em programas que desenvolvem plantas GM em larga escala, devido praticidade, rapidez e exatidão. MenosA caracterização molecular de plantas geneticamente modificadas (PGMs) quanto ao número de cópias do transgene em seu genoma, bem como do sítio de inserção, permite inferir sobre a estabilidade do genoma receptor após a transformação gênica. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar a eficácia e exatidão da quantificação do número de cópias de transgenes no genoma da soja utilizando à metodologia de PCR quantitativo (qPCR), comparado a técnica pioneira de Southern blotting. Foram testados dois sistemas de quantificação por qPCR que empregam a quantificação relativa: o método do 2-∆∆Ct, previamente descrito para estudos de expressão gênica, e o apresentado neste trabalho que propõe a utilização da própria referência endógena, o gene lectina, com calibrador, sendo necessário o ajuste da fórmula para 2-∆Ct/2. Neste caso, como o gene lectina apresenta uma cópia por genoma haplóide, enquanto as plantas GM geradas são hemizigotas para cada lócus onde qual o transgene se inseriu, o resultado final de número de cópias do transgene comparado ao número de cópias do gene lectina deve ser divido por 2. A exatidão de cada sistema foi determinada por comparações com a técnica de Southern blotting. Quatro eventos PGM contendo o gene DREB1A, tiveram o número de cópias do transgene quantificados via qPCR por quantificação relativa. De acordo com os resultados três eventos tiveram o número de cópias dos cassetes determinados pelas duas metodologias de quantificação por qPCR e confirm... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Eventos GM; Número de cópias; PCR quantitativo. |
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Thesagro: |
Genoma; Planta Transgênica; Soja. |
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Thesaurus Nal: |
Polymerase chain reaction; Southern blotting. |
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Categoria do assunto: |
X Pesquisa, Tecnologia e Engenharia |
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Marc: |
null
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Registro original: |
Embrapa Soja (CNPSO) |
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