03016nam a2200301 a 450000100080000000500110000800800410001910000200006024501820008026002640026252018750052665000300240165000220243165000110245365000240246465000090248865300150249765300230251265300210253570000210255670000160257770000200259370000210261370000160263470000210265070000220267170000210269314714232025-06-05       2009    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aROLLA, A. A. P.  aDesenvolvimento e validação de um método de determinação do número de cópias de transgenes no genoma da soja por quantificação relativa por QPCR.h[electronic resource]  aIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE SOJA, 5.; MERCOSOJA 2009, Goiânia. Anais... Londrina: Embrapa Soja, 2009. Seção trabalhos, t. 168. 1 CD-ROM. Editado por Adilson de Oliveira Júnior, Odilon Ferreira Saraiva, Clara Beatriz Hoffmann Campo, César de Castro.c2009  aA caracterização molecular de plantas geneticamente modificadas (PGMs) quanto ao número de cópias do transgene em seu genoma, bem como do sítio de inserção, permite inferir sobre a estabilidade do genoma receptor após a transformação gênica. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar a eficácia e exatidão da quantificação do número de cópias de transgenes no genoma da soja utilizando à metodologia de PCR quantitativo (qPCR), comparado a técnica pioneira de Southern blotting. Foram testados dois sistemas de quantificação por qPCR que empregam a quantificação relativa: o método do 2-∆∆Ct, previamente descrito para estudos de expressão gênica, e o apresentado neste trabalho que propõe a utilização da própria referência endógena, o gene lectina, com calibrador, sendo necessário o ajuste da fórmula para 2-∆Ct/2. Neste caso, como o gene lectina apresenta uma cópia por genoma haplóide, enquanto as plantas GM geradas são hemizigotas para cada lócus onde qual o transgene se inseriu, o resultado final de número de cópias do transgene comparado ao número de cópias do gene lectina deve ser divido por 2. A exatidão de cada sistema foi determinada por comparações com a técnica de Southern blotting. Quatro eventos PGM contendo o gene DREB1A, tiveram o número de cópias do transgene quantificados via qPCR por quantificação relativa. De acordo com os resultados três eventos tiveram o número de cópias dos cassetes determinados pelas duas metodologias de quantificação por qPCR e confirmados por Southern blotting. Somente um evento apresentou número de cópias superior por Southern blotting em relação ao qPCR. Os resultados demonstram a potencialidade da técnica na caracterização molecular em programas que desenvolvem plantas GM em larga escala, devido praticidade, rapidez e exatidão.  aPolymerase chain reaction  aSouthern blotting  aGenoma  aPlanta Transgênica  aSoja  aEventos GM  aNúmero de cópias  aPCR quantitativo1 aBENEVENTI, M. A.1 aFUGANTI, R.1 aMARIN, S. R. R.1 aFARIAS, J. R. B.1 aBINNECK, E.1 aABDELNOOR, R. V.1 aNEPOMUCENO, A. L.1 aMARCELINO, F. C.