03421nam a2200193 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501260007926000160020530000100022150002400023152026200047165300350309165300180312665300230314465300360316765300240320319482992018-04-04       2012    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aSANTANA, R. H.  aIsolamento e caracterização de promotores órgão-específicos de plantas de soja (Glycine max).h[electronic resource]  a2012.c2012  a97 f.  aDissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientadora: Vera Tavares de Campos Carneiro, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia; co-oriendora: Leila Maria Gomes Barros.  aA planta de soja (Glycine max [L.] Merr) destaca-se mundialmente pela diversidade de produtos que proporciona para uso animal e humano. No Brasil, a soja é o produto que mais gera divisas cambiais atualmente. No entanto, a produtividade dessa cultura e afetada por diversos fatores bióticos e abióticos. No melhoramento da soja, a engenharia genética tem sido utilizada como ferramenta para geração de novos cultivares capazes de superar essas adversidades. Nessa técnica, 0 usa de promotores órgão-específicos em detrimento de promotores constitutivos para expressar trans genes restringe sua expressão temporal e espacialmente, aumentando a biossegurança e estabilidade do sistema. Neste trabalho utilizamos dados transcriptômicos e genômicos de domínio público para identificar genes órgão-específicos de soja, isolar e caracterizar suas regiões promotoras. Os genes GmSuljTl e GmCitl foram identificados por meio de análises in silico em três bancos de ESTs de soja: GenoSoja, Unigene e da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Esses genes foram selecionados para validação biológica por apresentarem o perfil de EST órgão-específico em pelo menos dois dos bancos citados e pelo ineditismo. Seus perfis de expressão foram avaliados por RT-PCR semiquantitativa e Northern blot.. O GmSuljTl apresentou expressão preferencial em raiz e semente e 0 GmCitl, por sua vez, em folha de plantas de soja. As regiões promotoras desses genes foram identificadas no genoma da soja cv. Williams 82 e analisadas in silico para identificação de motivos putativos de elementos cis regulatórios. Iniciadores desenhados baseados nessas sequências foram capazes de amplificar fragmentos dessas regiões do genoma da soja cv. Conquista por PCR. Os promotores derivados de deleções da região promotora de GmSuljTl, PSulft0,5 e PCit0,4, PCit0,8 e PCitl,9, de GmCitl, foram clonados a montante do gene repórter gus em vetor binário utilizando o sistema Gateway®. Plantas de fumo (Nicotiana tabacum) foram transformadas para caracterização in vivo dos promotores. No ensaio histoquímico, 0 gene gus sob regulação dos promotores PSuIIT0,5, PCit0,8 e PCitl,9 apresentou altos níveis de expressão em raízes e folhas, enquanto 0 PCitO,4 preferencialmente em folha. PCitO,4 isolado no presente trabalho poderá ser utilizado futuramente para conferir expressão preferencial em folhas de transgênicos. 0 caráter de alta expressão de gus em mais de um órgão atribuído por PSulff0,5, PCit0,8 e PCitl,9, pode, da mesma forma, ser explorado para expressão de transgênes em plantas.  aCaracterização de promotores  aElementos cis  aPromotores de soja  aPromotores órgão-específicos  aRegulação gênica