03947nam a2200181 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501200007926000160019930000100021550002250022552032090045065000170365965300380367665300240371465300270373818873392023-12-20       2009    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aMACHADO, G. M.  aEfeito de diferentes protocolos de Percoll na qualidade espermática e na produção in vitro de empriões bovinos.  a2009.c2009  a67 f.  aDissertação (Mestrado em Ciências Animais) - Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientadora: Margot Alves Nunes Dode, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.  aTécnicas de preparação de sêmen são usualmente utilizadas na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos visando melhorar a qualidade espermática após o descongelamento. Dentre estas técnicas, a centrifugação em gradiente de Percoll tem sido a mais utilizada. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll nas características espermáticas, na produção e sexo de embriões bovinos. Foram descongeladas amostras de sêmen de quatro touros, que foram submetidas a três diferentes  procedimentos no gradiente de Percoll : TI - 4 mL (volume final) de Percoll 45%:90%, centrifugados por 20 minutos a 700 g; T2 - 800 IlL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por 20 minutos a 700 g e T3 - 800 IlL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por por 5 minutos a 5000 g. A avaliação espermática da motilidade, morfologia, integridade de acrossoma, membrana e cromatina, foi realizada antes e após a passagem pelo Percoll. Para a PIV foram utilizados 1194 ovócitos maturados in vitro, sendo a taxa de clivagem avaliada em D2 (48h) e a taxa de blastocisto avaliada no dia 7 após fecundação (D7). Os blastocistos em D7 (n=360) foram congelados para determinação do sexo. Os dados do desenvolvimento embrionário e avaliação espermática foram analisados pela ANOV A considerando o efeito de touro, tratamento e interação touro x tratamento (P&ltO,05). Para analisar o sexo dos embriões utilizou-se o teste -l com freqüência esperada de 50:50 (P&ltO,05). A comparação entre os tratamentos e touro também verificada pelo teste 'I:. Todos os tratamentos com o Percoll melhoraram significativamente a proporção de espermatozóides móveis. Não houve efeito do tratamento em nenhuma característica espermática avaliada (P&gt0,05), entretanto, observou-se efeito de touro. A taxa de clivagem e blastocito também não foi afetada pelos tratamentos com o Percoll. Entretanto, foi observado diferenças entre touros (P&lt0,05). A taxa de clivagem e blastocisto foi melhor para o touro 1 (86 ± 1,6lloJo e 47 ± 2,6C%) seguido do touro 2 (86 ± 2,la% e 39 ± 6,6C%) e touro 3 (65 ± 5,9b% e 17 ± 4,ld%). O touro 4 apresentou baixa produção total de blastocisto?(n=5), sendo eliminado da análise. A  proporção macho:fêmea foi semelhante em todos os tratamentos para os touros 2 e 3. Apenas o touro 1 no TI apresentou uma maior porcentagem de embriões machos (61 %) em relação aos embriões do sexo feminino (39%). Quando apenas os tratamentos foram considerados, independentes dos touros, não foi verificado diferença na proporção macho:fêmea entre TI (55:45 %), T2 (45:55 %) e T3 (44:56 %). Os resultados mostraram que a utilização de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll não influenciou a taxa de blastocisto e a relação macho:fêmea. Entretanto, para o touro 1 foi observado um desvio para produção de embriões machos quando se utilizou o Tl. Esses resultados sugerem a possibilidade de utilizar um menor volume de Percoll por um período de tempo mais curto, diminuindo assim o custo e o tempo para a realização da fecundação in vitro.  aEmbriogenese  aForça e tempo de centrifugação  aSeco dos emnbriões  aSeleção espermática