02942naa a2200241 a 450000100080000000500110000800800410001910000150006024501610007526000090023630000090024552020480025465000390230265300130234165300110235470000220236570000190238770000180240670000180242470000180244270000150246077302250247518760542011-02-07       2010    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aFORNER, O.  aFagA (Gene de aquisição de ferro) de Corynebacterium pseudotuberculosis como candidato a vacina de dna contra a linfadenite caseosah[electronic resource]  c2010  a1 p.  aA linfadenite caseosa (LC) é uma doença que acomete ovinos e caprinos, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. Ainda não há uma imunoprofilaxia eficiente contra este patógeno, provavelmente pelo escasso conhecimento de seus fatores de virulência. O gene fagA codifica uma proteína de membrana envolvida na aquisição de ferro para bactéria. Este gene foi identificado a partir da imunovarredura de uma biblioteca genômica de C. pseudotuberculosis utilizando soros de ovinos infectados com este patógeno, sugerindo o fagA como um bom candidato a antígeno vacinal. O objetivo neste trabalho foi construir um plasmídeo vacinal com o gene fagA e determinar a presença de mensagem para este gene em músculos de camundongos inoculados e em células de mamíferos COS-7 transfectadas com o plasmídeo vacinal denominado fagApcDNA. Primers foram desenhados para o gene fagA, gerando um fragmento de 1068 pb que foi clonado no vetor pcDNA3.1+ (Invitrogen®), transformado em cepas de Escherichia coli DH5? e purificado com Endofree Plasmid Giga KitTM (QIAGEN®). Para detecção de mensagem para fagA dois experimentos foram realizados. No primeiro, dois camundongos da linhagem Balb-C, com 9 semanas, receberam uma injeção intramuscular de 100 ?g de fagApcDNA, sendo um deles eutanasiado após 48 horas (M1) e o outro após 72 horas (M2) de inoculação. Depois, 100 mg do tecido alvo da injeção foram retirados e macerados com trizol. No segundo experimento, células COS-7 foram transfectadas com 2 ?g de fagApcDNA misturado ao reagente Cellfectin (Invitrogen®). Em seguida, as células foram ressuspensas em trizol e posteriormente, células e tecido foram processados para obtenção do RNA total, usado na detecção da mensagem para fagA por RT-PCR (ImProm-II? Reverse Transcription System ? Promega®). Como resultado preliminar, verificou-se a expressão de fagA apenas em M1. Porém, novos experimentos serão realizados para confirmar fagApcDNA como um bom candidato para uma vacina de DNA contra a LC.  aCorynebacterium Pseudotuberculosis  aCaprinos  aOvinos1 aROSINHA, G. M. S.1 aFRAGOSO, S. P.1 aSANTOS, L. R.1 aSOARES, C. O.1 aARAUJO, F. R.1 aELISEI, C.  tIn: JORNADA CIENTÍFICA DA EMBRAPA GADO DE CORTE, 6., 2010, Campo Grande, MS. Ética na pesquisa científica: [Anais da ...]. Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2010. 1 CD-ROM. Coordenadora: Vanessa Felipe de Souza