02776naa a2200217 a 450000100080000000500110000800800410001910000220006024500940008226000090017630000090018552020180019465000140221270000220222670000150224870000160226370000180227970000180229770000180231577302250233318759952011-02-07       2010    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aCAITANO, M. A. B.  aClonagem e expressão heteróloga do gene pgk de Brucella abortus.h[electronic resource]  c2010  a1 p.  aA brucelose é uma das doenças emergentes de importância mundial que afeta diversas espécies animais e o homem. A situação brasileira no controle de doenças infecciosas de animais requer melhorias para atingir os padrões internacionais e aumentar a produção. Por estes motivos o Ministério da Agricultura, Pecuária e abastecimento vem incentivado o desenvolvimento de novas vacinas e formas de diagnósticos para a brucelose bovina. Enzimas metabólicas tem sido envolvidas com a virulência de Brucella abortus. Uma delas é a fosfoglicerato cinase (PGK), codificada pelo gene pgk. Neste trabalho objetivou-se a produção da proteína recombinante PGK (PGKr) de B. abortus em sistema heterólogo de expressão, para posterior utilização em testes sorológicos para caracterização da cepa vacinal geneticamente modificada, B. abortus 2308Dpgk. Para isto, foi realizada a extração de DNA genômico da cepa S2308 de B. abortus e o gene pgk foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a partir de primers específicos. O produto da PCR foi ligado ao plasmídeo pMAL-c2E. A PGKr foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de amilose, após produção por indução com IPTG em Escherichia coli e, as frações obtidas foram dosadas por Bradford. Camundongos BALB/c foram injetados com 48 ?g da proteína emulsionada em adjuvante Montanide, via subcutânea. Foram realizadas três inoculações com intervalos de três semanas. Quinze dias após as inoculações, os soros sanguíneos destes animais e de animais vacinados com a cepa mutante S2308Dpgk, serão avaliados quanto a indução da resposta imune humoral por ELISA. Obteve-se apenas um clone recombinante, o qual foi submetido a indução da produção da proteína e da qual, duas frações purificadas foram dosadas, obtendo-se 2,62 mg da PGKr. Ao término deste estudo espera-se a padronização de um teste sorológico preciso, a fim de caracterizar a não expressão do gene pgk, na cepa mutante S2308Dpgk.  aBrucelose1 aROSINHA, G. M. S.1 aELISEI, C.1 aJANK, C. C.1 aSANTOS, L. R.1 aARAUJO, F. R.1 aSOARES, C. O.  tIn: JORNADA CIENTÍFICA DA EMBRAPA GADO DE CORTE, 6., 2010, Campo Grande, MS. Ética na pesquisa científica: [Anais da ...]. Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2010. 1 CD-ROM. Coordenadora: Vanessa Felipe de Souza