02765naa a2200241 a 450000100080000000500110000800800410001910000260006024501360008626000090022252018990023165000280213065300180215870000190217670000320219570000170222770000240224470000170226870000170228570000180230270000210232077301820234117092632009-01-06       2008    bl ---       0--  u    #d1 aOLIVEIRA, M. C. de S.  aCaracterização da atividade proteolítica dos produtos de excreção/secreção dos estágios lavares de cochliomyia hominivorax.  c2008  aLarvas da mosca Cochliomyia hominivorax causam graves miíases em bovinos criados nas Américas Central e do Sul.As fêmeas colocam seus ovos nos bordos de ferimentos recentes, na pele dos animais, e as larvas se estabelecem graças à secreção/excreção de enzimas proteolíticas. Larvas de C. hominivoraxforam criadas no laboratório de sanidade animal da Embrapa Pecuária Sudeste. Após serem lavadassucessivamente em solução salina, solução salina adicionada de VancomicinaR e água destilada estéril, grupos de 50 larvas foram colocados em placas de Petri contendo 5mL de meio RPMI. Após incubação por 12 horas (L 1 e L2) ou 24 horas (L3) a 370 C, as larvas foram descartadas e o meio centrifugado. Osobrenadante obtido foi distribuído em alíquotas de 100 ?L e armazenado a -80°C. A atividade proteolítica foi investigada aplicando-se as amostras desses produtos nativos em gel de poliacrilamida napresença de dodecil sulfato de sódio em sistema de gradiente 5-12,5%, copolimerizado com gelatina ou com colágeno a 0,2%. A natureza da proteólise foi avaliada nos mesmos géis, nos quais as amostras foram aplicadas após incubação prévia com cada um dos seguintes inibidores de proteases: PMSF, TLCK, TPCK, E-64, DCI, Elastatinal e EDTA. A análise da atividade proteolítica dos extratos sobre colágeno e gelatina revelou a presença de perfis caracterizados por amplas áreas de hidrólise, na faixa que se estende desde a região de massa molecular aparente&gt 170 kDa até 29 kDa; por uma zona de hidrólise intensa na região de 170 a 102 kDa e várias bandas com massas aparentes entre 45 e 74 kDa. A inibição da atividade proteolítica dos extratos de L 1 foi obtida principalmente pela incubação com PMSF e DCI; de L2, com DCI eL3, com PMSF. Esse tipo de inibição sugere a predominância de enzimas do grupo das serina proteases. roteases.Agradecimento  aCochliomyia Hominivorax  aProteolítica1 aGUIMARÃES, S.1 aOLIVEIRA-SEQUEIRA, T. C. G.1 aDAVID, E. B.1 aCHAGAS, A. C. de S.1 aBRITO, L. G.1 aGIGLIOTI, R.1 aFERREZINI, J.1 aHUACCA, M. E. F.  tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 15.; SEMINÁRIO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA DOS PAÍSES DO MERCUSUL, 2., 2008, Curitiba. Anais... Curitiba: CBPV, 2008.