06658nam a2200229 a 450000100080000000500110000800800410001910000200006024501210008026001360020150002100033752057430054765000120629065000100630265000170631265000140632965000170634365000100636065300080637065300400637865300100641816282162019-11-04       2005    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aSILVA, M. F. da  aAvaliação da colonização por Azospirillum spp. na cultura do milho (Zea mays L.) utilizando a técnica do ELISA.  a2005. 72 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Instituto de Agronomia, Seropédica, RJ.c2005  aOrientador: Verônica Massena Reis; Co-orientador: José Ivo Baldani. Evaluation of colonization by Azospirillum spp. in corn culture (Zea mays) through ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) technique.  aEste trabalho foi realizado na Embrapa - Agrobiologia, Seropédica-RJ no km 7 da BR 465, foram utilizados coelhos da raça Nova Zelândia para produção dos soros policlonais constituindo os soros As-Cd e As-Am15 que foram caracterizados para a quantificação do Azospirillum spp. inoculado no milho híbrido, utilizando os métodos de ELISA indireto e o Número Mais Provável (NMP). O objetivo foi produzir soros policlonais estirpe-específicos para detecção e quantificação das bactérias diazotróficas associativas do gênero Azospirillum spp. inoculadas no milho utilizando a técnica do ELISA. Foram conduzidos dois experimentos em casa-de-vegetação da Embrapa-Agrobiologia, em delineamento inteiramente casualizado, para quantificação da população de Azospirillum brasilense Cd, A. amazonense Am15 e a mistura das duas estirpes, inoculadas no milho pelos métodos ELISA e o NMP. O efeito da inoculação das bactérias no desenvolvimento do milho foi determinado através do acúmulo de biomassa e nitrogênio total na parte aérea. A qualidade do inoculante produzido foi analisada pelo método NMP durante o período de armazenamento de 180 dias. Os resultados mostraram que os soros desenvolvidos tornaram-se estirpe-específicos. Somente a estirpe Cd manteve o número de células viáveis em torno de 10 elevado a nona células g-1 de turfa até 120 dias de armazenamento. Foi possível quantificar no experimento um, com o soro policlonal Cd-Sp80, as estirpes Cd e a mistura inoculada as plantas de milho, estando os valores populacionais entre 10 elevado  a sexta e 10 elevado a quinta células g-1 de raízes frescas para a estirpe Cd e a mistura, respectivamente. O soro policlonal Am15-Ym10, detectou estirpes de Am15 e a mistura numa população de 10 elevado a sétima e 10 elevado a oitava células de g-1 de raízes frescas, respectivamente. Pelo método NMP para o mesmo experimento, a população variou de 10 elevado a quinta e 10 elevado a sexta células g-1 raízes frescas. No experimento dois, com o soro policlonal Cd-Sp80, foi detectado as estirpes Cd e a mistura inoculada nas plantas de milho, com valores populacionais variando de 10 elevado a oitava a 10 elevado a quarta e 10 elevado a terceira a 10 elevado a sexta células g-1 de raízes frescas, respectivamente. O soro policlonal Am15-Ym10, detectou para a estirpe Am15 e a mistura de 10 elevado a nona a 10 elevado a sexta e 10 elevado a décima a 10 elevado a sexta células g-1 de raízes frescas respectivamente. Pelo método NMP para o mesmo experimento, foi possível quantificar células viáveis estando entre 10 elevado a quinta e 10 elevado a sexta  células g-1 raízes frescas. O acúmulo da massa seca da parte aérea aos 30 d.a.i, para a mistura foi 110%, Cd 108% e Am15 138% quando comparado ao controle no substrato estéril. Para o acúmulo de massa seca da parte aérea no Planossolo, a estirpe Cd apresentou incremento de 42%, Am15, 12% e a mistura, 58%, respectivamente quando comparadas ao controle não inoculado. This work was conducted in Embrapa - Agrobiologia, Seropédica municipality - RJ State, km 7 of BR 465. New Zealand type rabbits were utilized for polyclonal antiserum production constituting As-Cd and As-Am15 serum that were characterized to quantify Azospirillum spp. and inoculated on hybrid maize, utilizing the methods indirect ELISA and Most Probable Number (NMP). The aim was to product specific strain polyclonal antiserum for detection and quantificationof diazotrophic bacteria associated to genus Azospirillum spp. inoculated on maize utilizing ELISA technique. Two experiments were conducted in Embrapa-Agrobiologia green house, with entirely randomized design, for quantification of population of Azospirillum brasilense Cd, A. amazonense Am15 and a mixture of the two strains, inoculated on maize by ELISA and NMP methods. The effect of bacteria inoculation on maize development was determined through biomass accumulation and total nitrogen in aerial mass. The inoculants quality was analyzed through MPN method during the storage period of 180 days. The results shown that developed serum became strain-specific. Only Cd strain maintained the viable cells number around 10 elevado a nona cells g-1 peat until 120 days of storage. It was possible to quantify on the experiment one, with Cd-Sp 80 polyclonal antiserum, the Cd strain and mixture inoculated in maize plants. The populations values among 10 elevado a sexta and 10 elevado a quinta cells g-1 fresh roots to Cd strain and mixture, respectively. The Am15-Ym10 polyclonal antiserum detected Am15 strain and mixture on a population of 10 elevado a sétima and 10 elevado a oitava cells g-1 fresh roots, respectively. By MPN method the same experiment population ranged 10 elevado a quinta-10 elevado a sexta cells g-1 fresh roots. In experiment two, with Cd-Sp 80 polyclonal antiserum, it was detected Cd strain and mixture inoculated maize plants. The population values ranged from 10 elevado a oitava to 10 elevado a quarta and 10 elevado a terceira to 10 elevado a sexta cells g-1 fresh roots, respectively. The Am15-Ym10 polyclonal antiserum detected to Am15 strain and the mixture 10 elevado a nona until 10 elevado a sexta and 10 elevado a décima to 10 elevado a sexta cells g-1 fresh roots, respectively. On the MPN method, on the same experiment it was possible to quantify viable cells among 10 elevado a quinta and 10 elevado a sexta cells g-1 fresh roots. The 138% when compared to control on sterile substrate. For dry mass accumulation of aerial part on the Planossolo (Fragiudult), the Cd strain showed an increase of 42% Am15, 12% and the mixture, 58%, respectively when compared to the non inoculated control.  agrasses  aAdubo  aFertilizante  aGramínea  aInoculação  aMilho  aFBN  aFixação biológica de nitrogênio  aMaize