04184nam a2200253 a 450000100080000000500110000800800410001910000170006024501860007726000160026330000110027950001500029052032850044065000220372565000180374765000190376565000280378465000100381265000300382265000250385265300170387765300180389465300180391215319692019-11-25       2003    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aCHAPAVAL, L.  aDetecção de enterotoxinas estafilocócicas produzidas por Staphylococcus aureus no leite bovino por eletroforese capilar e identifidação dos isolados enterotoxigênicos via PCR.  a2003.c2003  a130 f.  aTese (Doutorado em Ciências. Energia Nuclear na Agricultura) - Universidade de São Paulo, Centro de Energia Nucelar na Agricultura, Piracicaba.  aResumo: O interesse na quantificação das enterotoxinas se deve ao fato do conhecimento  atual sabre a ação nociva destas a saude humana e da necessidade da certificação do  leite e seus derivados, tendo como principal efeito a garantia de qualidade alimentar tanto  para o consumo interno como para exportação, dentro dos padrões internacionais. Neste  trabalho foram avaJiados par tecnicas moleculares atraves de PCR (Polymerase Chain  Reaction), a presença de genes enterotoxigenicos (SEA a SEE) e genes da TSST -1 em  Staphylococcus aureus provenientes de 132 amostras de leite da regiao da cidade de Piracicaba - SP e de duas fazendas leiteiras com diferentes niveis de manejo de ordenha : foram avaliados par tecnicas moleculares atraves de PCR (Polymerase Chain Reaction) . Para otimização da metodologia de extrac;ao de DNA de S. aureus, desenvolveu-se um  protocolo sem o uso de lisoestafina, diminuindo assim o custo operacional.  Posteriormente verificou-se o potencial de prqdução de enterotoxin a estafilococica nas  amostras positivas (cepas contendo um ou mais genes enterotoxigenicos), atraves do uso  da tecnica de celofane sabre agar e detecção pelo metodo da Sensibilidade otima em  Placas (OSP). Todas as cepas foram examinadas para SEA, SEB, SEC2, SED e SEE.  Amostras que se mostraram positivas para produção de enterotoxina estafilococica tipo  C2 (SEC2) foram posteriormente analisadas atraves da Eletroforese Capilar de Zona para  a detecção deste metabolito, a partir dog extratos obtidos pela tecnica de asp.  A metodologia de extração de DNA desenvolvida rendeu majores quantidades de DNA quando comparada a metodologias anteriormente publicadas para esta finalidade,  mostrando coeficiente de variação menor (C. V. 41,44% com P&lt 0,01 % em relação a  89,15% com a metodologia com parada). A qualidade do DNA tambem foi satisfatoria para  amplificação dog produtos de PCR para todos as cepas de Staphylococcus aureus  testadas. Com relação a detecção de genes enterotoxigenicos (SEA a SEE) e gene da  TSST -1, a tecnica de PCR mostrou-se eficiente com relação as amostras avaliadas,  sendo que 69,7% das amostras se mostraram posltlvas para a presença e um ou mais genes. Em nossos estudos, das 92 amostras de Staphylococcus aureus analisadas, 15,22% de mostraram positivas para produção de enterotoxin a A (SEA), 29,35% para produção de enterotoxina B (SEB), 5,44% para produção de enterotoxina C2 (SEC2), 4,35% para produçõ concomitante de SEA e SEB e 2,17% para produção de concomitante de SEB e SEC2. A tecnica de Eletroforese Capilar de Zona (CZE), usada para quantificaçãoo da enterotoxin a estafilococica C2 a partir do sobrenadante de cultura obtido atraves da tecnica de celofane sabre agar mostrou niveis de detecção compativeis com a tecnica de Sensibilidade 6tima em Placas (aSp), tendo apresentado boa precisao, repetibilidade e rapidez na detecção de SEC2. Urn outro estudo avaliou o efeito do estresse termico na produção das SEs em leite e cornprovou que a temperatura pode influir de rnaneira significativa na produção de SEs em leite, atentando-se para que as recornendações quanta a higiene e refrigeração da produçõate a comercializaçãao sejam efetivamente respeitadas.  aDisease diagnosis  aMilk analysis  aStaphylococcus  aIntoxicação Alimentar  aLeite  aMicrobiologia de Alimento  aSegurança Alimentar  aEnterotoxina  aEstafilococos  aLeite de vaca