03194nam a2200181 a 450000100080000000500110000800800410001910000200006024501200008026000160020030000100021650001100022652025840033665000270292065300310294765300220297865300120300014919742023-10-17       2009    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aSILVA, R. B. da  aCaracterização molecular de Bacillus thuringiensis utilizando REP-PCR e perfil plasmidial.h[electronic resource]  a2009.c2009  a83 f.  aDissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Lavras, Lavras. Orientador: Fernando Hercos Valicente.  aOs insetos constituem uma das principais causas de danos à produção agrícola no mundo. O controle de insetos tem sido realizado essencialmente por meio de agroquímicos. A bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis tem sido utilizada como alternativa de controle. É uma bactéria Gram-positiva que ocorre naturalmente no solo e produz proteínas na forma de cristais que são tóxicas a uma variedade de insetos entre as ordens Lepidoptera, Diptera, e Coleóptera. Apresenta alta variabilidade genética e está amplamente distribuída na natureza. O presente trabalho objetivou a caracterização de cepas pertencentes ao banco de B. thuringiensis da EMBRAPA-CNPMS, quanto ao perfil plasmídial e avaliar a diversidade genética com base nas sequências repetitivas ERIC e REP. O perfil plasmidial foi avaliado pela migração das bandas em gel de agora se sendo possível visualizar o perfil de 49 das 60 cepas utilizadas. Cepas pertencentes a uma mesma subespécie apresentaram diferentes migrações de plasmídeos, com exceção das cepas 348L e 462A pertencentes à subespécie galleriare. A cepa T09 Bt tolworthi apresentou migração plasmidial idêntica as duas cepas galleriare citadas à cima. Assim obtivemos 46 cepas com perfil plasmidiais distintos, fazendo desta técnica uma ferramenta útil para discriminar cepas específicas, tomando-se valiosa em termos de propriedade intelectual e reivindicações. A divergência genética entre 56 cepas foi estimada utilizando ferramenta com base em PCR com primers específicos para as seqüências ERIC e REP. Sendo os fragmentos gerados analisados por eletroforese em géis de agarose ou poliacrilamida. As distâncias genéticas foram obtidas pelo complemento do coeficiente de Jaccard e os agrupamentos foram realizados pelo método UPGMA com aplicação de bootstrap para verificar a consistências dos agrupamentos. Uma segunda análise de grupos foi realizada pelo método de Tocher. Os primers ERIC e Bc-REP detectaram grande divergência genética entre as 56 cepas de B. thuringiensis com formação de 21 grupos quando considerado um ponto de corte de 60%. Entre estes houve valores de bootstrap acima de 50% e grupos com valores de bootstrap abaixo de 50%, parece estarem relacionados com número de bandas, que foram menores nestes casos. Alguns grupos formados com o método Tocher estavam de acordo com os grupos obtidos com o agrupamento UPGMA. Aparentemente, alguns dos grupos formados parecem estar relacionados com mortalidade e procedência, necessitando mais estudos para confirmação.  aBacillus Thuringiensis  aCaracterização molecular  aPerfil plasmidial  aREP-PCR