02879nam a2200193 a 450000100080000000500110000800800410001910000260006024501210008626000160020730000110022350001280023452022400036265000160260265000140261865000100263265300260264265300170266814894142023-10-17       2005    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aCASTANHEIRA, A. L. M.  aDiversidade genética de isolados de Spiroplasma kunkelii e reações em genótipos de milho.h[electronic resource]  a2005.c2005  a150 f.  aTese (Doutorado em Genética e Melhoramento de Plantas) - Universidade Federal de Lavras, Lavras. Orientador-Edilson Paiva.  aO microorganismo Spiroplasma kunkelii causa enfezamento pálido em plantas de milho. O estudo do patógeno e a identificação de variabilidade são importantes no estabelecimento de um programa de melhoramento visando à resistência a doenças. Este trabalho teve como objetivo estudar a diversidade genética entre isolados geográficos do espiroplasma e sua reação em diferentes genótipos de milho. Os isolados foram coletados em quatro locais: Dourados (MS), ltumbiara (GO), Sete Lagoas (MG) e Uberlândia (MG). Esses isolados foram cultivados in vivo, em plantas de milho suscetíveis ao enfezamento pálido, e também foram cultivados in vitro, utilizando-se o meio de cultura LD8A3. Os isolados cultivados in vitro apresentaram crescimento lento, entre 17 e 20 semanas, mas foi possível detectar a presença de espiroplasma nos meios de cultura com um período de 11 semanas utilizando-se a metodologia de Westem Blotting. Os isolados mantidos in vivo foram utilizados para a inoculação em quatro linhagens e quatro híbridos de milho. Foi possível observar que plantas infectadas com espiroplasma apresentaram redução significativa no desenvolvimento e na translocação de nutrientes como Mg, Ca, S e Fe da parte aérea das plantas para os grãos. A variabilidade genética dos isolados foi estudada em nível molecular, utilizando-se marcadores AFLP e RFLP. Para a análise de AFLP foram utilizadas 10 combinações de primers e obtidas 448 bandas. No entanto, o polimorfismo observado foi baixo, com apenas 26,6% de bandas polimórficas. Os resultados mostraram que a diversidade genética entre os isolados foi baixa. A diversidade genética dentro das populações foi cerca de oito vezes maior que a diversidade entre populações de isolados. Para a realização da análise por RFLP foi utilizado o gene da espiralina como sonda. Foram utilizadas cinco enzimas de restrição, Dral, HinfI, Msel, Xmnl, e BamHI, e não foram observadas diferenças no padrão delas para o gene da espiralina. Este resultado confirma que o gene da espiralina é uma região altamente conservada no genoma do espiroplasma, e não deve ser utilizado como sonda em análises de diversidade genética entre isolados de espiroplasma.  aEnfezamento  aGenótipo  aMilho  aDiversidade genética  aEspiroplasma