04841nam a2200337 a 450000100080000000500110000800800410001910000200006024501270008026000160020730000110022350001050023452038930033965000170423265000150424965000100426465000150427465000220428965000140431165000190432565000120434465000160435665000160437265000230438865000220441165000130443365300090444665300130445565300170446865300180448512419792011-01-11       1997    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aMERCANTE, F. M.  aDiversidade genética de Rizobio que nodula o feijoeiro e troca de sinais moleculares na simbiose com plantas hospedeiras.  a1997.c1997  a195 f.  aTese (Philosophiae Doctor em Agronomia) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica.  aA importancia da biodiversidade tem sido cada vez mais ressaltada, como fonte de inovacao tecnologica. Neste contexto, a aplicacao das tecnicas modernas de biologia molecular tem permitido a deteccao de grupos de microrganismos ate agora desconhecidos, alem de revelar a extensao da diversidade genetica dentro do "taxon" microbiano. No caso dos microssimbiontes do feijoeiro, o avanco das tecnicas de biologia molecular e a avaliacao de novos isolados provenientes de diversas regioes tropicais e mesoamericanas, permitiu, nos ultimos anos, a separacao em 3 especies diferentes: R.leguminosarum bv. phaseoli, R.tropici e R.etli. Poucos sao os estudos sobre a diversidade de rizobio existente nos solos brasileiros. Num levantamento realizado em diversas regioes do Cerrado brasileiro, nos isolamos 422 estirpes de rizobio que nodulam o feijoeiro e Leucaena. Trinta e sete desses isolados foram utilizados como base para a classificacao das estirpes de R.tropici. A selecao de estirpes de R.tropici tem despertado bastante interesse, uma vez que estas estirpes apresentam caracteristicas agronomicas importantes, como a tolerancia a estresses ambientais, entre os quais, temperaturas elevadas, resistencia a metais pesados e a niveis elevados de antibioticos, alem de se apresentarem mais estaveis geneticamente. Neste sentido, na primeira parte do presente estudo, procurou-se caracterizar a diversidade genetica de um grande numero de isolados de rizobio dos solos do Cerrado brasileiro, pelo metodo de hibridizacao de colonias com sondas de genes especificas. Os resultados obtidos demonstraram uma grande variabilidade entre os isolados, sendo o grupo de estirpes isoladas de nodulos de feijoeiro mais heterogeneo do que os isolados de nodulos de Leucaena. Entre os isolados de Leucaena (329), 90% foi agrupado com R.tropici, e o restante (10%) nao foi agrupado em nenhuma das especies de rizobio descritas ate o momento. Por outro lado, entre os isolados de feijoeiro (61), 35% foram classificados como R.tropici, 16% como R.leguminosarum bv. phaseoli ou R.etli, e 49% nao foram agrupadas com os microssimbiontes do feijoeiro conhecidos. Estes resultados, embora considerados como uma estimativa da variabilidade das estirpes de rizobio, demonstram uma ampla fonte de diversidade genetica de isolados adaptados aos solos acidos do ecossistema Cerrado. Em outra parte do estudo, procurou-se avaliar a etapa inicial da troca de sinais moleculares entre o feijoeiro e seus duferentes microssimbiontes. Assim, procurou-se verificar a influencia de plantas de Mimosa flocculosa ou Leucaena leucocephala na nodulacao do feijoeiro, avaliou-se, ainda, este efeito pela adicao de exsudatos de sementes destas especies arboreas no plantiop do feijoeiro, inoculado com estirpes de R.tropici, R.etli e R.leguminosarum bv. phaseoli e/ou suprido com nitrogenio mineral. Alem disso, avaliou-se a expressao dos genes nod, atraves da atividade da enzima B-glucuronidase em diferentes estirpes contendo a fusao nodA::gusA, utilizando como indutores exsudatos de raizes e de sementes de leguminosas. De uma maneira geral, observou-se uma interacao bastante complexa entre os indutores. A adicao de exsudatos de sementes, tanto de M.flocculosa quanto de L. leucocephala, proporcionou um aumento significativo na nodulacao inicial do feijoeiro, quando inoculado com a estirpe de rizobio CFN42(R.etli). A nodulacao do feijoeiro (em vasos com solo PVA) nao foi afetada pelo suprimento de N-mineral (28 mg N-NH4NO3.planta -1), quando as plantas foram inoculadas com a estirpe CIAT899 (R.tropici) e supridas com exsudatos de sementes de M.flocculosa. Nos testes "in vitro", a mistura de exsudatos de sementes de feijoeiro e M.flocculosa promoveu aumentos sinergisticos significativos na expressao dos genes nod, tanto das estirpes de R.tropici (CIAT899/pGUS32 e F98.5/pGUS32) quanto de R.etli (CFN42/pGUS32).  abiodiversity  aflavonoids  ahosts  anodulation  aRhizobium tropici  asymbiosis  aBiodiversidade  aFeijão  aFlavonóide  aNodulação  aPhaseolus Vulgaris  aPlanta Hospedeira  aSimbiose  aBean  aGene gus  aHibridizacao  aHibridization