02982nam a2200445 a 450000100080000000500110000800800410001910000230006024501280008326000700021130000100028149000940029152015930038565000180197865000230199665000260201965300250204565300240207065300340209465300240212865300180215265300240217065300150219470000230220970000230223270000250225570000200228070000170230070000210231770000160233870000200235470000220237470000170239670000250241370000160243870000170245470000200247170000200249170000250251111871872016-02-22       2005    bl uuuu     u0uu1 u    #d1 aSILVA, M. C. M. da  aEvolução molecular in vitrobseleção de moléculas inseticidas para insetos-praga do algodoeiro.h[electronic resource]  aBrasília, DF : Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologiac2005  a22 p.  a(Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Boletim de pesquisa e desenvolvimento, 99).  aO bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis) e a lagarta do cartucho (Spodoptera frugiperda) são insetos que causam perdas significativas para a agricultura devido aos danos causados à cultura do algodão. Estratégias biotecnológicas utilizam proteínas envolvidas com a defesa de plantas, incluindo as d-endotoxinas e os inibidores de a-amilases (aAIs), como ferramentas no desenvolvimento de plantas resistentes aos insetos-praga. Neste contexto, a estratégia envolvendo a evolução in vitro de moléculas, por meio da técnica de DNA shuffling, tem sido aplicada para gerar moléculas variantes, com melhor toxicidade e especificidade para insetos-praga. Quatro bibliotecas combinatórias foram construídas utilizando as técnicas de DNA shuffling e Phage display. Três genes para toxinas Cry (cry1Ia12, cry3Aa1 e cry8Ha), assim como a recombinação dos genes aAI-1 and aAI-2, isolados de sementes de Phaseolus vulgaris, foram utilizados para a reação de DNA shuffling, gerando bibliotecas individualizadas. Cada uma das bibliotecas de variantes de aAIs e de toxinas Cry geraram cerca de 105-107 genes mutantes, que foram selecionados in vitro contra as a-amilases e BBMV intestinal (Brush Border membrane Vesicles) dos insetos, A. grandis e S. frugiperda. Os genes para moléculas variantes foram expressos na superfície de fagos e as proteínas recombinantes foram avaliadas em bioensaios. Os dados obtidos confirmam a eficiência da estratégia na geração de um grande número de moléculas variantes, com atividade e especificidade melhoradas para insetos-praga alvos.  aDNA shuffling  aAnthonomus Grandis  aSpodoptera Frugiperda  aBicudo do algodoeiro  aCultura do algodão  aEstratégias biotecnológicas  aEvolução in vitro  aInsetos praga  aLagarta do cartucho  aMoléculas1 aBRUNETTA, P. S. F.1 aFIGUEIRA, E. L. Z.1 aMAGALHÃES, M. T. Q.1 aOLIVEIRA, G. R.1 aRAMOS, H. B.1 aSARTO, R. P. del1 aCRUZ, C. M.1 aOLIVEIRA, R. S.1 aCAVALCANTI, K. L.1 aCRAVEIRO, K.1 aBARBOSA, A. E. A. D.1 aPAES, N. S.1 aROCHA, T. L.1 aTEIXEIRA, F. R.1 aCOUTINHO, M. V.1 aGROSSI-DE-SÁ, M. F.