03569nam a2200229 a 450000100080000000500110000800800410001910000150006024501200007526000150019530000270021050002100023752027480044765000290319565000140322465000100323865000120324865000240326065000170328465300170330165300210331811719452008-03-25       2007    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aBONFIM, K.  aResistência ao Bean golden mosaic virus mediada por RNA interferente em plantas de feijoeiro (Phaseolus vulgaris).  a2007c2007  aPaginação irregular.  aTese (Doutorado em Biologia Molecular) - Instituto de Biologia, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientador: Francisco Jose Lima Aragão, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Contem anexo.  aA produção mundial de feijão, compreendendo os gêneros Phaseolus e Vígna, é superior a 18 milhões de toneladas e o Brasil ocupa o segundo lugar na produção mundial e o primeiro quando se trata apenas do gênero Phaseolus. Entretanto, sua produção ainda está aquém do necessário para suprir a demanda interna. Dentre os principais problemas relacionados com a baixa produção de feijão no Brasil estão a competição com plantas daninhas, estresse hídrico e o ataque de pragas e doenças como mosaico dourado do feijoeiro causado por um geminivírus. O Bean golden mosaíc vírus (BGMV), é transmitido por mosca-branca (Bemícía tabaci) de uma forma persistente, circulativa, causando mosaico dourado em feijão comum (Phaseolus vulgarís). Os sintomas característicos são: mosaico verde amarelado nas folhas, nanismo e vagens distorcidas. A doença é largamente disseminada nas regiões de produção de feijão no Brasil e América Latina causando perdas severas (40 -100%). Neste trabalho, a tecnologia de RNA interferente foi explorada usando uma seqüência do gene viral ACl para gerar plantas transgênicas de feijão comum altamente resistentes a geminivírus. Desta maneira o gene viral (ACl) foi escolhido para a construção do vetor de transformação uma vez que a proteína Rep exerce uma função essencial no ciclo de infecção vira!. Rep não é uma replicase porém é a única proteína requerida para a replicação do genoma viral. O vetor pBGMVRNAiAHAS foi construído a partir de um fragmento de DNA de 411 pb do gene ACl do BGMV (~1836-2247, acesso no GeneBank No. M88686). Dezoito linhagens de f~ijão foram obtidas com a construção de interferência, as quais poderão induzir o silenciamento pós-transcricional do gene AC1. Uma linhagem (denominada 5.1) apresentou alta resistência (aproximadamente 93% das plantas não apresentaram sintomas) após alta pressão de inoculação (mais de 300 moscas-brancas virulíferas por planta). Os siRNAs específicos foram detectados nas plantas transgênicas, ambas inoculadas e não inoculadas. Uma análise de PCR semiquantitativo revelou a presença do DNA viral nas plantas transgênicas expostas a moscas-brancas virulíferas por um período de 6 dias. Entretanto, após a retirada dos insetos, não foi detectado DNA viral após um período adicional de seis dias. Devido à importância social e econômica do feijão na América Latina e à falta de genes para resistência a doenças nos bancos de germoplasma, faz-se necessário o desenvolvimento de um programa de melhoramento associado à engenharia genética para o lançamento de novas variedades, que possibilitará a diminuição dos principais problemas relacionados a esta cultura.  aBean golden mosaic virus  aPhaseolus  aVigna  aFeijão  aPlanta Transgênica  aResistência  aMosca-Branca  aRNA interferente