02889nam a2200229 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501570007926001950023630000090043152020390044065000180247965300180249765300270251570000180254270000220256070000220258270000190260470000190262370000170264221070572022-11-18       2019    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aLIMA, P. P. A.  aPadronização de PCR Multiplex para detecção direta e diferenciação de espécies de Campylobacter em Queijo Minas Artesanal.h[electronic resource]  aIn: WORKSHOP DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA EMBRAPA GADO DE LEITE, 23., 2019, Juiz de Fora. Anais... Juiz de Fora: Embrapa Gado de Leite, 2019. (Embrapa Gado de Leite. Documentos, 234).c2019  a5 p.  aResumo: O Queijo Minas Artesanal (QMA) é um potencial carreador de patógenos zoonóticos. Campylobacter spp. tem sido o patógeno mais frequentemente associado a surtos de doenças de origem alimentar no mundo. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma ferramenta promissora para uma detecção rápida e direta de Campylobacter nos alimentos. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método molecular baseado em PCR multiplex para identificação direta de Campylobacter em QMA. No primeiro ensaio de PCR, as amostras foram artificialmente contaminadas com um mix igual de C. jejuni (CAMP 492) e C. coli (CAMP 1004) para ajustar as condições da PCR (&gt108 UFC/g) para estabelecer o limite de detecção. O DNA dessas amostras foi extraído pelo método que utiliza fenol/clorofórmio. Posteriormente, o ensaio de PCR multiplex foi realizado utilizando primers para os genes Campylobacter (16S rRNA), C. jejuni (hipO) e C. coli (ceuE). Cinco protocolos foram testados, variando diferentes concentrações de MgCl2, tampão, concentração de DNA, temperatura de anelamento, concentração de gel de agarose e voltagem da corrida de eletroforese. A presença de Campylobacter spp. foi avaliada em 81 amostras de QMA de diferentes origens. O protocolo de PCR multiplex foi ajustado para as amostras artificialmente contaminadas. O limite de detecção foi estimado em 103 UFC/g. Campylobacter não foi encontrado em nenhuma dessas 81 amostras usando esse protocolo de PCR multiplex. No entanto, 29 (35,8%) dessas 81 amostras foram consideradas positivas, quando apenas os primers do gene 16S rRNA foram usados nas reações. O método padronizado é efetivo para detectar Campylobacter em amostras artificialmente contaminadas, mas não é robusto o suficiente para detecção em amostras de diferentes origens, provavelmente devido à complexidade da matriz desses queijos e baixo limite de detecção. Apesar disso, a presença de amostras positivas usando o primer 16S rRNA é um importante problema de saúde pública.  aCampylobacter  aPCR multiplex  aQueijo Minas Artesanal1 aHOSKEN, B. O.1 aGONÇALVES, A. G.1 aALMEIDA, P. A. A.1 aRIBEIRO, J. B.1 aHUNGARO, H. M.1 aSILVA, M. R.