03856nam a2200169 a 450000100080000000500110000800800410001910000230006024501180008326000160020130000100021750001720022752032210039965300280362065300170364865300210366520708062017-06-12       2017    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aFERREIRA, M. T. L.  aRelação entre as metilações do DNA e da histona H3 com o comportamento dos sítios de rDNA 45S em comossomos.  a2017.c2017  a54 f.  aDissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento de Plantas) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, MG. Co-orientador: Andréa Mittelmann, Embrapa Gado de Leite.  aResumo: As gramíneas pertencentes ao complexo Lolium-festuca apresenta papel de destaque no cenário agropecuário brasileiro, principalmente nas regiões Sul e Sudeste. Elas são mundialmente conhecidas por suprir o déficit forrageiro característico do período de inverno nos países de clima temperado. Por estes e outros motivos, os estudos citogenéticos para as espécies foram impulsionados. . Vários são os trabalhos que evidenciaram uma plasticidade do comportamento dos sítios de rDNA 45S, por exemplo, na variação do número e posição dos sítios relacionados até pouco tempo à possível fragilidade dos loci que, consequentemente, justificava a presença de sítios estendidos e gaps nas metáfases. Essa organização estendida das regiões organizadoras do nucléolo pode ser avaliada em relação a sua atividade/acessibilidade transcricional por meio das alterações epigenéticas. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a influência da metilação nas citosinas (5-mCyt), diretamente relacionada ao silenciamento gênico, e da dimetilação da lisina 9 na histona H3 (H3K9me2), associada a estrutura heterocromática, nas diferentes conformações dos sítios de rDNA 45S, nos núcleos interfásicos e nos cromossomos metafásicos de dois genótipos de cada espécie de Lolium perenne, L. multiflorum e Festuca arundinacea. As técnicas de imunomarcação foram realizadas em combinação com a FISH (dribridização in situ fluorescente) para a localização dos sítios de rDNA. As lâminas foram feitas com células meristemáticas pré-tratadas e não pré-tratadas a -4 ºC, fixadas em Carnoy (etanol:ácido acético, 3:1 v/v) e a imunodetecção, realiazda de forma indireta, via anticorpo primário anti-H3K9me2 rabbit policlonal e anti-5-metil-citosina mouse monoclonal. Estes foram detectados com anticorpo secundário anti-rabblit FITC-conjugado e mouse FITC-conjungado. A FISH foi realizada sequencialmente à imunomarcação, utilizando sondas de rDNA 45S obtidas de Triticum aestivum L. (pTa 71). A partir da combinação destas duas técnicas pôde-se perceber uma relação direta entre as marcas epigenéticas e as diferentes conformações das RONs. Nos núcleos interfásicos foram observados predominantemente sítios intra e perinucleolares que, em sua maioria, estavam hipometilados e/ou hiper/hipometilados, descondensados ou parcialmente condensados. Os sítios extranucleolares apresentaram-se predominantemente hipermetilados para ambas as marcas epigenéticas e, consequentemente, eram vistos na forma de blocos condensados heterocromáticos. Nas metáfases foram evidenciados sítios hipermetilados, hipometilados e não metilados. Os sítios de rDNA 45S com gapas identificados nas metáfases estavam sempre hipometilados ou não metilados para H3K9 e também para 5-mCyt, o que justifica o estado descondensado e apto a transcrever. A frequência de sítios com gaps hipermetilados foi muito baixa. Assim, as diferenças estruturais nestes sítios nas três espécies estudadas estão relacionadas diretamente com as marcas epigenéticas analisadas, justificando as diferentes conformações nos núcleos interfásicos e ao longo do ciclo celular.  aComplexo Lolium-Festuca  aEpigenética  aSítios frágeis