04361nam a2200181 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501630007926000160024230000100025850000850026852037730035365300130412665300120413965300130415165300150416420544632023-02-09       2015    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aBARBOSA, E. M.  aPolimorfismo na região promotora, éxon I e éxon II do gene do receptor da melatonina associadas às características reprodutivas em búfalas na Amazônia.  a2015.c2015  a56 f.  aTese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Federal do Pará, Belém, PA.  aA produção de bubalinos no Estado do Pará é uma atividade de alta representatividade para a economia regional e produção de carne, leite e derivados. Portanto, é necessário desenvolver  novas tecnologias que aumente o desfrute da produção e reprodução de bu balinos na região Amazônica. Sendo assim, os objetivos desta tese de pesquisa foram caracterizar a região  promotora do gene do receptor da melatonina I A (MTRNIA) e identificar polimorfismos nos éxons I e 11 do referido gene e associá-los a características reprodutivas de relevância  econômica em búfalas na região Amazônica. Foram coletados amostras de pelos de 400 búfalas e foram usados 60 animais para caracterização da região promotora, 140 para detectar  o polimorfismo (SNPs) no éxon II e 77 para detectar o polimorfismo no éxon l. Foi realizada a extração de DNA pelo método fenólico. Em seguida selecionaram-se os diferentes  iniciadores para realizar as reações em cadeia da polimerase (PCR). A região promotora do MTRN1A foi sequenciada em um total de 1621 pares de base pelo método de Sanger, o  polimorfismo no éxon II foi detectado através da técnica de PCR-RFLP (Polimorfismo de restrição de comprimento de fragmentos) com a enzima HpaI e o polimorfismo no éxon I foi  detectado através do sequenciamento de DNA pelo método Sanger. Foram avaliadas as frequências alélicas e genotípicas de todos os SNPs, os coeficientes de endocruzamento (Fis)  e as probabilidades de Hardy- Weinberg. Os SNPs da região promotora e do éxon I foram associados com características reprodutivas das búfalas pelo ANOVA, ou teste t de Student  e/ou teste qui-quadrado. O nível de significância foi de 0,05. Foram detectados 26 SNPs na região promotora nas posições -1511 (C-T), -1465 (G-T), -1422 (A-G), -1411 (G-A), -  1395 (G-T), -1298 (A-G), -1295(G-A), -1242 (A-C), -1150 (C-T), -1147 (G-C), - 1136(A-G), -911 (G-A), -909 (A-G), -724 (C-G), -656 (A-C), -649 (T-C), -644 (G-A), -511 (A-C), -481 (G-A), -425 (C-T), -395 (G-A), -383 (G-T), -254 (C-T),- 206 (T-C), -133 (T-G) e -94 (C-T) e um bloco de deleção (ACAA) na posição -1483. Do total de S Ps detectados, 75% dos alelos selvagens tiveram frequências maiores que 0,5. Para a característica Intervalo entre Parto (lEP), somente cinco S Ps (-1298, -1136, -911, -724 e - 656) foram significativamente associados (P&lt0,05) e outros três SNPs (-1395, -724 e -94) foram associados significativamente (P&lt0,05) com a característica Idade ao Primeiro Parto (IPP) e nenhum para a característica concentração de partos (P&gt0,05). Um total de II SNPs foi fortemente associado a fatores de ligação para a regulação gênica. O SNP no éxon 11 por PCR-RFLP (HpaI) na posição 306 de (T -C), sendo o alelo T mais frequente nos animais de Terra Firme (0,529) e o C em animais de Várzea, as duas populações apresentaram coeficientes de endocruzamento Fis (0,040 e 0,091, respectivamente) e fortes desvios de Hardy- Weinberg (P&gt0,05). A mutação ocorre no ] 06° codon e é do tipo sinonímia sem alteração da estrutura de alças do RNA mensageiro. O SNP no éxon I foi detectado na posição  62 (T ~C) do tipo não sinonímio, trocando de Leucina para Prolina. O alelo mutante C foi o mais frequente (0,623), coeficiente de endocruzamento Fis=0,397 e desvios de Hardy- Weinberg (P&lt0,05). enhum dos genótipos foram associados ao intervalo entre partos e a idade do primeiro parto (P&gt0,05). Portanto, os SNPs são fortes candidatos para seleção, mas seria interessante avaliá-los em outros rebanhos na região Amazônica e/ou em outras regiões do Brasil e/ou em outros países para efetivá-Ios como excelentes marcadores moleculares para características reprodutivas de bubalinas.  aBúfalas  aÉxon I  aÉxon II  aMelatonina