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Registros recuperados : 11 | |
2. | | SILVA, Z. da; SOUZA, A. P. de; SUPERTI, B. F. V.; ROSA, C. A. da V. L.; MARQUES, M. G. Medium and temperature optimization for the recovery of membrane integrity of swine spermatozoa submitted to electroporation. In: ANNUAL MEETING OF THE BRAZILIAN EMBRYO TECHNOLOGY SOCIETY, 31., 2017, Cabo de Santo Agostinho, PE. Proceedings... Belo Horizonte: Colégio Brasileiro de Reprodução Animal, 2017. p. 874. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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3. | | SILVA, Z. da; LUNKES, C. M.; MATIELLO, C. T.; PANDOLFI, J. R. C.; TAVERNARI, F. de C.; MARQUES, M. G. Efeito da suplementação dietética com selênio sobre arquitetura histológica testicular de galos. In: JORNADA DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA, 14., 2020, Concórdia. Anais... Concórdia: Embrapa Suínos e Aves: UNC, 2020. p. 68-69. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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5. | | SILVA, Z. da; SOUZA, A. P. de; ROSA, C. A. da V. L.; PANDOLFI, J. R. C.; FONSECA, F. M. da; MARQUES, M. G. Engenharia genética em suínos: aplicações, metodologias e perspectivas futuras. Revista Científica de Avicultura e Suinocultura, v. 5, n. 1, p. 027-040, 2019. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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6. | | MARQUES, M. G.; DALLA COSTA, O. A.; SOUZA, A. P.; SILVA, Z. da; LEAL, D. F.; VIANA, C. H. C.; MORÉS, N. Inaccurate assessment of reproductive status leads to unnecessary removal of cycling sows. In: SIMPÓSIO INTERNACIONAL DE PRODUÇÃO E SANIDADE DE SUÍNOS, 3., 2019, Jaboticabal. Anais... Jaboticabal: UNESP/FCAV, 2019. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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7. | | SILVA, Z. da; SOUZA, A. P. de; PANDOLFI, J. R. C.; FONSECA, F. M. da; LIMA-ROSA, C. A. da V.; MARQUES, M. G. Comparison between electroporation versus polyfection in pig sperm: efficiency and cell viability implications. Zygote, v. 26, n. 4, p. 286-293, 2018. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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8. | | SUPERTI, B. F. V.; SOUZA, A. P. de; MÜLLER, B. C.; SILVA, Z. da; ZANELLA, R.; ZANELLA, E. L.; MARQUES, M. G. Comparison of different surgical procedures to prepare teaser boars. In: ANNUAL MEETING OF THE BRAZILIAN EMBRYO TECHNOLOGY SOCIETY, 31., 2017, Cabo de Santo Agostinho, PE. Proceedings... Belo Horizonte: Colégio Brasileiro de Reprodução Animal, 2017. p. 809. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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9. | | SUPERTI, B. F. V.; SOUZA, A. P. de; MÜLLER, B. C.; SILVA, Z. da; ZANELLA, E. L.; ZANELLA, R.; MARQUES, M. G. Development of effective and minimally invasive surgical techniques for the preparation of intact, sterile boars. Journal of Swine Health and Production, v. 20, n. 5, p. 253-260, 2021. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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10. | | SILVA, Z da; FONSECA, F. M. da; PANDOLFI, J. R. C.; SOUZA, A. P.; ROSA, C. A. V. L.; MARQUES, M. G. Polyethyleneimine (PEI) as polyfection system for swine sperm. In: ANNUAL MEETING OF THE BRAZILIAN EMBRYO TECHNOLOGY SOCIETY, 32., 2018, Florianópolis. Abstract? SBTE, 2019. Animal Reproduction, v. 15, n. 3, p. 509, July/Sept. 2018. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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11. | | SUPERTI, B. F. V.; SOUZA, A. P. de; MÜLLER, B. C.; SILVA, Z. da; ZANELLA, R.; ZANELLA, E. L.; MARQUES, M. G. Técnicas cirúrgicas para preparo de rufiões suínos. Suinocultura Industrial, Itu, ed. 281, ano 40, n. 02, p. 14-17, 2018. Biblioteca(s): Embrapa Suínos e Aves. |
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Registros recuperados : 11 | |
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| Acesso ao texto completo restrito à biblioteca da Embrapa Suínos e Aves. Para informações adicionais entre em contato com cnpsa.biblioteca@embrapa.br. |
Registro Completo
Biblioteca(s): |
Embrapa Suínos e Aves. |
Data corrente: |
20/03/2019 |
Data da última atualização: |
20/03/2019 |
Tipo da produção científica: |
Orientação de Tese de Pós-Graduação |
Autoria: |
SILVA, Z. da. |
Afiliação: |
ZIGOMAR DA SILVA, UDESC. |
Título: |
Transfecção de espermatozoides suínos por polifecção e eletroporação. |
Ano de publicação: |
2018 |
Fonte/Imprenta: |
2018. |
Páginas: |
96 f. |
Descrição Física: |
Dissertação (Pós-graduação em Ciência Animal) - Centro de Ciências Agroveterinárias, Universidade do Estado de Santa Catarina, Lages, SC. |
Idioma: |
Português |
Notas: |
Orientador: Mariana Groke Marques. |
Conteúdo: |
Suínos transgênicos são criados para várias finalidades, podendo ser usados como biorreatores ou como modelos para estudos de doenças humanas e na pecuária. Estes podem ser obtidos por várias metodologias, porém, devido a sua simplicidade e baixo custo, a transgenia mediada por espermatozoide apresenta-se como uma metodologia bastante promissora. Visando aumentar a eficiência desta técnica, em outras espécies são usados métodos químicos, como a polifecção utilizando a polietilenoimina (PEI) e físicos, como a eletroporação, que possibilitam aos espermatozoides captarem maiores quantidades de DNA exógeno (eDNA), mas nenhum destes esta padronizado para suínos. O objetivo deste estudo foi otimizar protocolos para o uso da eletroporação e d a polifecção utilizando a polietilenoimina na transfecção de espermatozoides suínos e definir qual destes métodos é o mais eficiente. Para isso, utilizou-se doses inseminantes de 10 machos suínos de linhagens comerciais, que foram divididas em amostras de 2x106spz/mL. Para a padronização da eletroporação estas amostras foram testadas duas voltagens (500 ou 1000 volts) em um pulso único ou duplo, com duas durações de pulso (250 ou 500μs). Já para a padronização da PEI foram testadas quatro diferentes concentrações (0,5, 1, 2 ou 4) mg/mL de PEI, marcada com a sonda FITC, incubando-se durante 10 minutos, 2 e 4 horas. Os dois melhores protocolos para cada um dos métodos foram analisados por citometria de fluxo quanto a viabilidade celular, empregando-se as sondas FITC, PI, laranja de acridina e JC1, as quais, avaliam, respectivamente, a integridade de membrana, de acrossoma, de cromatina e potencial mitocondrial. O protocolo, de cada método, que apresentou melhor viabilidade celular foi utilizado na transfecção com o plasmídeo pmhyGENIE-5, sendo que para a eletroporação elegeu-se 500 volts, 500 μs e 2 pulsos e para a PEI o melhor protocolo foi 0,5mg/mL, com incubação de 10 minutos. Após, uma alíquota das amostras foi utilizada para avaliação da viabilidade celular, por citometria de fluxo e outra alíquota foi destinada a hibridização in situ fluorescente, para a detecção do plasmídeo nos espermatozoides. A FISH foi realizada utilizando duas sondas, ambas com 200 bases cada. Como teste, utilizouse uma sonda para o gene EGPF do plasmídeo, marcada com o fluoróforo Cyanine 5, e como controle da reação, uma sonda para o gene cromossômico suíno SRY, esta marcada com Cyanine 3. A avaliação das laminas da FISH foi realizada em microscópio de fluorescência (Axio Observer A1, Carl Zeiss), pela contagem de 100 espermatozoides por lamina e a observação do número de marcações para cada uma das sondas. O método de incubação, que foi utilizado como controle demonstrou uma taxa de transfecção de 17,80%±1,07. A eletroporação teve 36,70%±2,78 de eficiência, enquanto a taxa de transfecção da PEI foi de 76,8%±3,09, demonstrando que estes métodos foram mais eficientes que a incubação. A eletroporação, apesar da maior taxa de transfecção, este método causou grande taxa de lesão de acrossoma. A polifecção, da mesma forma, teve alta taxa de lesão de acrossoma, bem como de membrana citoplasmática. Devido a isso, é recomendável que os espermatozoides transfectados por estes métodos sejam utilizados em biotécnicas de fertilização, como a injeção intracitoplasmática de espermatozoide. MenosSuínos transgênicos são criados para várias finalidades, podendo ser usados como biorreatores ou como modelos para estudos de doenças humanas e na pecuária. Estes podem ser obtidos por várias metodologias, porém, devido a sua simplicidade e baixo custo, a transgenia mediada por espermatozoide apresenta-se como uma metodologia bastante promissora. Visando aumentar a eficiência desta técnica, em outras espécies são usados métodos químicos, como a polifecção utilizando a polietilenoimina (PEI) e físicos, como a eletroporação, que possibilitam aos espermatozoides captarem maiores quantidades de DNA exógeno (eDNA), mas nenhum destes esta padronizado para suínos. O objetivo deste estudo foi otimizar protocolos para o uso da eletroporação e d a polifecção utilizando a polietilenoimina na transfecção de espermatozoides suínos e definir qual destes métodos é o mais eficiente. Para isso, utilizou-se doses inseminantes de 10 machos suínos de linhagens comerciais, que foram divididas em amostras de 2x106spz/mL. Para a padronização da eletroporação estas amostras foram testadas duas voltagens (500 ou 1000 volts) em um pulso único ou duplo, com duas durações de pulso (250 ou 500μs). Já para a padronização da PEI foram testadas quatro diferentes concentrações (0,5, 1, 2 ou 4) mg/mL de PEI, marcada com a sonda FITC, incubando-se durante 10 minutos, 2 e 4 horas. Os dois melhores protocolos para cada um dos métodos foram analisados por citometria de fluxo quanto a viabilidade celular, em... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Eletroporação; Polietilenoimina. |
Thesagro: |
Espermatozóide; Organismo Transgênico; Reprodução Animal; Suinocultura. |
Categoria do assunto: |
-- |
Marc: |
LEADER 04200nam a2200205 a 4500 001 2107284 005 2019-03-20 008 2018 bl uuuu m 00u1 u #d 100 1 $aSILVA, Z. da 245 $aTransfecção de espermatozoides suínos por polifecção e eletroporação.$h[electronic resource] 260 $a2018.$c2018 300 $a96 f.$cDissertação (Pós-graduação em Ciência Animal) - Centro de Ciências Agroveterinárias, Universidade do Estado de Santa Catarina, Lages, SC. 500 $aOrientador: Mariana Groke Marques. 520 $aSuínos transgênicos são criados para várias finalidades, podendo ser usados como biorreatores ou como modelos para estudos de doenças humanas e na pecuária. Estes podem ser obtidos por várias metodologias, porém, devido a sua simplicidade e baixo custo, a transgenia mediada por espermatozoide apresenta-se como uma metodologia bastante promissora. Visando aumentar a eficiência desta técnica, em outras espécies são usados métodos químicos, como a polifecção utilizando a polietilenoimina (PEI) e físicos, como a eletroporação, que possibilitam aos espermatozoides captarem maiores quantidades de DNA exógeno (eDNA), mas nenhum destes esta padronizado para suínos. O objetivo deste estudo foi otimizar protocolos para o uso da eletroporação e d a polifecção utilizando a polietilenoimina na transfecção de espermatozoides suínos e definir qual destes métodos é o mais eficiente. Para isso, utilizou-se doses inseminantes de 10 machos suínos de linhagens comerciais, que foram divididas em amostras de 2x106spz/mL. Para a padronização da eletroporação estas amostras foram testadas duas voltagens (500 ou 1000 volts) em um pulso único ou duplo, com duas durações de pulso (250 ou 500μs). Já para a padronização da PEI foram testadas quatro diferentes concentrações (0,5, 1, 2 ou 4) mg/mL de PEI, marcada com a sonda FITC, incubando-se durante 10 minutos, 2 e 4 horas. Os dois melhores protocolos para cada um dos métodos foram analisados por citometria de fluxo quanto a viabilidade celular, empregando-se as sondas FITC, PI, laranja de acridina e JC1, as quais, avaliam, respectivamente, a integridade de membrana, de acrossoma, de cromatina e potencial mitocondrial. O protocolo, de cada método, que apresentou melhor viabilidade celular foi utilizado na transfecção com o plasmídeo pmhyGENIE-5, sendo que para a eletroporação elegeu-se 500 volts, 500 μs e 2 pulsos e para a PEI o melhor protocolo foi 0,5mg/mL, com incubação de 10 minutos. Após, uma alíquota das amostras foi utilizada para avaliação da viabilidade celular, por citometria de fluxo e outra alíquota foi destinada a hibridização in situ fluorescente, para a detecção do plasmídeo nos espermatozoides. A FISH foi realizada utilizando duas sondas, ambas com 200 bases cada. Como teste, utilizouse uma sonda para o gene EGPF do plasmídeo, marcada com o fluoróforo Cyanine 5, e como controle da reação, uma sonda para o gene cromossômico suíno SRY, esta marcada com Cyanine 3. A avaliação das laminas da FISH foi realizada em microscópio de fluorescência (Axio Observer A1, Carl Zeiss), pela contagem de 100 espermatozoides por lamina e a observação do número de marcações para cada uma das sondas. O método de incubação, que foi utilizado como controle demonstrou uma taxa de transfecção de 17,80%±1,07. A eletroporação teve 36,70%±2,78 de eficiência, enquanto a taxa de transfecção da PEI foi de 76,8%±3,09, demonstrando que estes métodos foram mais eficientes que a incubação. A eletroporação, apesar da maior taxa de transfecção, este método causou grande taxa de lesão de acrossoma. A polifecção, da mesma forma, teve alta taxa de lesão de acrossoma, bem como de membrana citoplasmática. Devido a isso, é recomendável que os espermatozoides transfectados por estes métodos sejam utilizados em biotécnicas de fertilização, como a injeção intracitoplasmática de espermatozoide. 650 $aEspermatozóide 650 $aOrganismo Transgênico 650 $aReprodução Animal 650 $aSuinocultura 653 $aEletroporação 653 $aPolietilenoimina
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