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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Soja. |
Data corrente: |
11/12/2009 |
Data da última atualização: |
16/10/2012 |
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
Autoria: |
PAULA, R. A. de; FREITAS, R. F. F. e; GUIMARAES, M. F. M.; MARCELINO, F. C.; ARCURI, E. F. |
Afiliação: |
ROSINÉIA APARECIDA DE PAULA, AGROGENÉTICA; RENATA FLÁVIA FERREIRA E FREITAS, AGROGENÉTICA; MARTA FONSECA MARTINS GUIMARAES, CNPGL; FRANCISMAR CORREA MARCELINO, CNPSo; EDNA FROEDER ARCURI, CNPGL. |
Título: |
Uso de brometo de etídeo monoazida e PCR em tempo real para detecção de células viáveis de listeria monocytogenes. |
Ano de publicação: |
2009 |
Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, 25., 2009, Porto de Galinhas. Anais... [São Paulo]: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. Seção Resumos, ref. 1420-2. 1 CD-ROM. |
Idioma: |
Português |
Conteúdo: |
A análise de PCR em Tempo Real está sendo cada vez mais utilizada para detecção e quantificação de patógenos em amostras de alimentos, uma vez que gera resultados mais rápidos e específicos. A restrição para um uso mais amplo desta técnia é que devido a sua alta sensibilidade, os teste identificam o DNA de células mortas, tornando-o inadequado para fins de diagnóstico. Para contornar este problema tem sido proposto o uso do corante Brometo de Etídeo Monoazida (EMA) para discriminar células viáveis de células mortas. Em estudos preliminares foi verificado que EMA inibe amplificação de células inviáveis de Listeria monocytogenes, por PCR convencional. O objetivo deste estudo foi padronizar a técnica EMA-PCR em Tempo Real para detecção de células viáveis de L. monocytogenes. Foram construídos primers e sonda TaqMan específicos para L. monocytogenes e o gene prfA foi utilizado como seqüência alvo. Foram avaliadas várias espécies de Listeria, sendo que houve amplificação apenas de L. monocytogenes indicando especificidade da amplificação e L. monocytogenes ATCC 7644 foi selecionada para os testes de EMA-PCR. Concentrações variadas de EMA foram adicionadas a microtubos com 108 células viáveis ou inviáveis de L. monocytogenes (tratamento térmico de 98 oC/20 minutos) e estes foram expostos à luz (650 W) por 15 minutos para ativação e fotólise do EMA. Em segida, foi realizada a extração de DNA e PCR em Tempo Real. O DNA foi extraído após tratamentos subseqëntes das células com proteases e fervura. A reação de amplificação foi preparada com TaqMan Universal Master Mix 1X (Applied Biosystem), 250 ng de DNA, 400 nM de cada primer e 400 nM de sonda. A concentração de 6 ug/mL de EMA foi necessária para inibir a amplificação de DNA de células inviáveis de L. monocytogenes sendo que nesta concentração não houve interferência na amplificação de DNA de células viáveis. Após a definição desta concentração, o tratamento das células com 6 ug/mL de EMA foi realizado novamente, porém os microtubos foram expostos à luz por diferentes períodos de tempo para otimização do tempo de exposição à luz. O tempo de 5 minutos foi necessário para a completa fotólise de EMA. A técnica EMA-PCR em Tempo Real apresenta-se como uma ferramenta eficiente na detecção de apenas células viáveis de L. monocytogenes presentes numa amostra. MenosA análise de PCR em Tempo Real está sendo cada vez mais utilizada para detecção e quantificação de patógenos em amostras de alimentos, uma vez que gera resultados mais rápidos e específicos. A restrição para um uso mais amplo desta técnia é que devido a sua alta sensibilidade, os teste identificam o DNA de células mortas, tornando-o inadequado para fins de diagnóstico. Para contornar este problema tem sido proposto o uso do corante Brometo de Etídeo Monoazida (EMA) para discriminar células viáveis de células mortas. Em estudos preliminares foi verificado que EMA inibe amplificação de células inviáveis de Listeria monocytogenes, por PCR convencional. O objetivo deste estudo foi padronizar a técnica EMA-PCR em Tempo Real para detecção de células viáveis de L. monocytogenes. Foram construídos primers e sonda TaqMan específicos para L. monocytogenes e o gene prfA foi utilizado como seqüência alvo. Foram avaliadas várias espécies de Listeria, sendo que houve amplificação apenas de L. monocytogenes indicando especificidade da amplificação e L. monocytogenes ATCC 7644 foi selecionada para os testes de EMA-PCR. Concentrações variadas de EMA foram adicionadas a microtubos com 108 células viáveis ou inviáveis de L. monocytogenes (tratamento térmico de 98 oC/20 minutos) e estes foram expostos à luz (650 W) por 15 minutos para ativação e fotólise do EMA. Em segida, foi realizada a extração de DNA e PCR em Tempo Real. O DNA foi extraído após tratamentos subseqëntes das células com protea... Mostrar Tudo |
Thesagro: |
Bactéria; DNA; Higiene de alimento; Nutrição humana. |
Thesaurus Nal: |
Bacterial infections; Food and Human Nutrition. |
Categoria do assunto: |
H Saúde e Patologia |
URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/34513/1/uso.pdf
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Marc: |
LEADER 03267nam a2200229 a 4500 001 1577770 005 2012-10-16 008 2009 bl uuuu u00u1 u #d 100 1 $aPAULA, R. A. de 245 $aUso de brometo de etídeo monoazida e PCR em tempo real para detecção de células viáveis de listeria monocytogenes. 260 $aIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, 25., 2009, Porto de Galinhas. Anais... [São Paulo]: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. Seção Resumos, ref. 1420-2. 1 CD-ROM.$c2009 520 $aA análise de PCR em Tempo Real está sendo cada vez mais utilizada para detecção e quantificação de patógenos em amostras de alimentos, uma vez que gera resultados mais rápidos e específicos. A restrição para um uso mais amplo desta técnia é que devido a sua alta sensibilidade, os teste identificam o DNA de células mortas, tornando-o inadequado para fins de diagnóstico. Para contornar este problema tem sido proposto o uso do corante Brometo de Etídeo Monoazida (EMA) para discriminar células viáveis de células mortas. Em estudos preliminares foi verificado que EMA inibe amplificação de células inviáveis de Listeria monocytogenes, por PCR convencional. O objetivo deste estudo foi padronizar a técnica EMA-PCR em Tempo Real para detecção de células viáveis de L. monocytogenes. Foram construídos primers e sonda TaqMan específicos para L. monocytogenes e o gene prfA foi utilizado como seqüência alvo. Foram avaliadas várias espécies de Listeria, sendo que houve amplificação apenas de L. monocytogenes indicando especificidade da amplificação e L. monocytogenes ATCC 7644 foi selecionada para os testes de EMA-PCR. Concentrações variadas de EMA foram adicionadas a microtubos com 108 células viáveis ou inviáveis de L. monocytogenes (tratamento térmico de 98 oC/20 minutos) e estes foram expostos à luz (650 W) por 15 minutos para ativação e fotólise do EMA. Em segida, foi realizada a extração de DNA e PCR em Tempo Real. O DNA foi extraído após tratamentos subseqëntes das células com proteases e fervura. A reação de amplificação foi preparada com TaqMan Universal Master Mix 1X (Applied Biosystem), 250 ng de DNA, 400 nM de cada primer e 400 nM de sonda. A concentração de 6 ug/mL de EMA foi necessária para inibir a amplificação de DNA de células inviáveis de L. monocytogenes sendo que nesta concentração não houve interferência na amplificação de DNA de células viáveis. Após a definição desta concentração, o tratamento das células com 6 ug/mL de EMA foi realizado novamente, porém os microtubos foram expostos à luz por diferentes períodos de tempo para otimização do tempo de exposição à luz. O tempo de 5 minutos foi necessário para a completa fotólise de EMA. A técnica EMA-PCR em Tempo Real apresenta-se como uma ferramenta eficiente na detecção de apenas células viáveis de L. monocytogenes presentes numa amostra. 650 $aBacterial infections 650 $aFood and Human Nutrition 650 $aBactéria 650 $aDNA 650 $aHigiene de alimento 650 $aNutrição humana 700 1 $aFREITAS, R. F. F. e 700 1 $aGUIMARAES, M. F. M. 700 1 $aMARCELINO, F. C. 700 1 $aARCURI, E. F.
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Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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Biblioteca(s): Embrapa Café. |
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Biblioteca(s): Embrapa Florestas; Embrapa Semiárido. |
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Biblioteca(s): Embrapa Agrobiologia. |
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74. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | SILVA, A. B. da; GOMES, E. C.; SANTOS, J. C. P. dos; ACCIOLY, L. J. de O.; SOUSA, A. R. de; SILVEIRA, H. L. F. da; SILVA, D. F. da. Potencial pedológico do município de Coruripe - Alagoas para o cultivo de cana-de-açúcar. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA DO SOLO, 32., 2009, Fortaleza. O solo e a produção de bioenergia: perspectivas e desafios. [Viçosa, MG]: SBCS; Fortaleza: UFC, 2009. 1 CD-ROM.Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Solos. |
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79. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | SILVA, D. F. da; GARCIA, P. H. de M.; CAVALCANTE, J. T.; FERREIRA, P. V.; SAMPAIO, L. V. A.; SILVA, A. J. A. C.; SILVA, M. T. da; SILVA NETO, J. V. da; NASCIMENTO, M. da S.; COSTA, L. M. da S.; SILVA, C. J. C. da; CAMARA, T. M. M. Avaliação biométrica de caracteres morfológicos de genótipos de milho e sorgo submetidos a duas densidades de semeadura. In: CONGRESSO ACADÊMICO INTEGRADO DE INOVAÇÃO E TECNOLOGIA, 1., 2016, Alagoas. Anais... Alagoas: UFAL, 2016. Resumo.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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Biblioteca(s): Embrapa Semiárido. |
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