Data/hora: 16/06/2024 09:54:12

Biblioteca(s): | Embrapa Gado de Corte.
Data corrente: | 03/06/2015
Data da última atualização: | 26/04/2024
Autoria: | CAITANO, M. A. B.; JANK, C. C.; SANTOS, L. R. dos; SOARES, C. O.; ROSINHA, G. M. S.
Afiliação: | MARRIELEN APARECIDA BENITES CAITANO, UNIVERSIDADE PARA O DESENVOLVIMENTO DO ESTADO E DA REGIÃO DO PANTANAL; CARINA CALIXTO JANK, UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL; LENITA RAMIRES DOS SANTOS, CNPGC; CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC; GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC.
Título: | Clonagem e expressão heteróloga do gene pgk de Brucella abortus.
Ano de publicação: | 2013
Fonte/Imprenta: | Bio(in)formação, v. 6, n. 6, 2013.
Páginas: | p. 249-266
Idioma: | Português
Conteúdo: | A brucelose é uma das doenças emergentes mais importantes mundialmente na atualidade, afetando diversas espécies animais e o homem. A situação brasileira no controle de doenças infecciosas de animais requer melhorias para atingir os padrões internacionais e aumentar a produção. Por estes motivos o MAPA vem incentivado o desenvolvimento de novas vacinas e formas de diagnósticos para a brucelose bovina. Enzimas metabólicas têm sido descritas no envolvimento da virulência de Brucella abortus. Uma delas é a fosfoglicerato cinase (PGK), codificada pelo gene pgk. Neste trabalho objetivou-se a produção da proteína recombinante PGK (PGKr) de B. abortus em sistema heterólogo de expressão, para caracterização da cepa vacinal geneticamente modificada, B. abortus 2308 p r 8 pgk por western blot e posterior utilização em testes sorológicos. Para isto, foi realizada a extração de DNA genômico da cepa S2308 de B. abortus e o gene pgk foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a partir de primers específicos. O produto da PCR foi ligado ao plasmídeo pMAL-c2E. O clone recombinante, foi submetido à indução da produção da proteína em Escherichia coli. A PGKr foi purificada por cromatografia de afinidade e duas frações purificadas foram dosadas por Bradford, obtendo-se 2,62 mg da PGKr. Camundongos BALB/c foram injetados com a proteína emulsionada em adjuvante Montanide, via subcutânea. Foram realizadas três inoculações com intervalos de três semanas. Quinze dias após as inoculações, os soros sanguíneos destes animais foram coletados e separados para avaliação pelo método de Western Blot. Os soros confirmaram a produção de anticorpos contra o antígeno e pode-se observar que no ensaio com a cepa selvagem o anticorpo reagiu mostrando que a produção da proteína PGK está intacta nesta cepa e com a cepa mutante S2308 08 pgk o anticorpo não reagiu, mostrando que a produção da proteína PGK é nula, confirmando realmente a deleção do gene pgk nesta cepa.
Palavras-Chave: | Fosfoglicerato cinase.
Thesagro: | Bovino; Brucelose; Clonagem.
Thesaurus Nal: | Brucellaceae.
Categoria do assunto: | --
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/124979/1/18.pdf
Registro original: | Embrapa Gado de Corte (CNPGC)
Exemplares: | CNPGC - (16194-1) - UPC - AP - DD -  -  -  - DIS