Data/hora: 20/06/2024 03:40:40

Biblioteca(s): | Embrapa Agrobiologia.
Data corrente: | 04/01/2006
Data da última atualização: | 04/01/2006
Autoria: | RIBEIRO, J. R. de A.; RUMJANEK, N. G.
Título: | Aplicação do método de Elisa indireto para determinação da taxa de estabelecimento de inoculante rizobiano a partir de extratos de nódulos de leguminosas.
Ano de publicação: | 2004
Fonte/Imprenta: | Agronomia, Seropédica, RJ, v. 38, n. 1, p. 71-77, 2004.
Idioma: | Português
Notas: | Use of indirect Elisa method on legume nodule extracts to determine the rate of rhizobial inoculant establishment.

Conteúdo:

A identificação da estirpe de rizóbio formadora do nódulo de leguminosa é uma etapa importante na seleção de inoculantes eficientes e competitivos. Neste trabalho, o método de Elisa (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) indireto foi adaptado de modo a utilizar diretamente o extrato de nódulo, dispensando o cultivo da bactéria e diminuindo o tempo de análise. A purificação do anti-soro com proteína A de Staphylococcus aureus permitiu uma redução de cerca de 50% na taxa de reação cruzada. Foram produzidos 12 anti-soros policlonais em coelhos, utilizando como antígeno, isolados de nódulos de caupi e estirpes de referência de espécies de Bradyrhizobium. Foi determinado que a estocagem do antígeno (-20° C) diretamente na microplaca,  durante uma semana, pode ser realizada sempre que conveniente sem prejuízo para o resultado do teste de Elisa. O tamanho do nódulo é capaz de influenciar o resultado do teste e nódulos grandes apresentam reação mais intensa que os pequenos (< 1mm). Porém, os resultados foram confiáveis de acordo com a margem de segurança utilizada, independente do tamanho dos nódulos. A padronização adequada do método de Elisa indireto permite a tipagem de grande quantidade de nódulos proporcionando um subsídio importante para a seleção de inoculantes rizobianos.
The identification of the rhizobium strain present in a leguminous nodule is na essential step for the selection of efficient and competitive inoculants. In this work, indirect Elisa (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) was applied on legume nodule extracts speeding up the strain identification by eliminating bacterial isolation steps from culture media. Anti-serum purification with Staphylococcus aureus protein A, reduced 50% of cross-reaction rate. Twelve polyclonal anti-sera were produced in rabbits using as antigen, strains isolated from cowpea nodules and, reference strains of Bradyrhizobium species. Storing the nodule antigens directly on the microplate during a week (-20° C) did not interfere with the Elisa results and may be used when convenient. Nodule size influences the test results and large nodules (> 1 mm) showed significantly stronger reactions than the small ones. However regardless of size, readings were reliable according to the safety margin used. Method standardization may help on the identification of large nodule number becoming na important subsidy for the rhizobial inoculant selection.

Palavras-Chave: | Competitividade.
Thesagro: | Elisa; Proteína; Técnica Imunoenzimática.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Agrobiologia (CNPAB)
Exemplares: | CNPAB - (33032-1) - UPC - SP - -- -  -  - 0023056 - DIS