Data/hora: 20/06/2024 08:22:56

Biblioteca(s): 	Embrapa Gado de Corte.	
Data corrente: 	28/01/2011	
Data da última atualização: 	22/02/2011	
Autoria: 	SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L.	
Afiliação: 	CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS; BOLSISTA CNPGC; RENATO ANDREOTTI E SILVA, CNPGC; CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS.	
Título: 	Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris.	
Ano de publicação: 	2010	
Fonte/Imprenta: 	In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM.	
Páginas: 	1 p.	
Idioma: 	Português	
Conteúdo: 	A proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo.	
Palavras-Chave: 	Bm86-CG; Precipitação.	
Thesagro: 	Proteína.	
Categoria do assunto: 	--	
Registro original: 	Embrapa Gado de Corte (CNPGC)	
Exemplares: 	CNPGC - (13554-1) - UPC - PL - CD - CD-147 - CON -  - DIS