Data/hora: 23/09/2024 15:44:01

Biblioteca(s): 	Embrapa Uva e Vinho.	
Tipo da produção científica: 	Orientação de Tese de Pós-Graduação	
Data corrente: 	14/02/2013	
Data da última atualização: 	31/01/2019	
Autoria: 	DUBIELA, C. R.	
Afiliação: 	CARLA ROSA DUBIELA, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARINGÁ.	
Título: 	Detecção por RT-PCR em tempo real (Taqman) e caracterização molecular parcial de vírus que infectam a videira.	
Ano de publicação: 	2012	
Fonte/Imprenta: 	2012.	
Páginas: 	114 f.	
Descrição Física: 	il., color.	
Idioma: 	Português	
Notas: 	Dissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento) - Universidade Estadual de Maringá, Maringá. Orientado por Eliezer Rodrigues de Souto, UEM; e co-orientado por Thor Vinícius Martins Fajardo, CNPUV.	
Conteúdo: 	Nos últimos anos, o Brasil tem se destacado na produção de uvas, seja para consumo in natura ou para processamento. Contudo, a ocorrência de doenças é sempre mencionada como uma das ameaças à viticultura, pois pode ocasionar danos significativos à produção e à qualidade da uva. Dentre os patógenos da videira, os vírus merecem destaque devido aos danos que podem causar, o que pode comprometer a viabilidade econômica desta atividade. Cerca de 60 espécies virais infectam a videira; no Brasil, já foram detectados dez vírus nesta cultura: Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV-1, -2, -3, -5 e -6), Grapevine virus A e B (GVA e GVB), Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV), Grapevine fleck virus (GFkV) e Grapevine fanleaf virus (GFLV). A aplicação, das ferramentas de diagnose dos vírus que infectam a videira, evolui continuamente, marcadamente a RT-PCR em Tempo Real, técnica que vem ganhando espaço no diagnóstico viral em função das vantagens sobre a PCR convencional. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a eficiência da RT-PCR em Tempo Real (TaqMan), variação que utiliza sonda marcada com um fluoróforo, para a detecção de dez importantes espécies virais que infectam a videira no Brasil: GLRaV-1, -2, -3 e -5, GVA, GVB, Grapevine virus D (GVD), GRSPaV, GFkV e GFLV. As reações visaram promover detecções individuais ou simultâneas (duplex e triplex). RNAs totais de videiras sadias e comprovadamente infectadas com estes vírus foram utilizados em ensaios tipo presença/ausência empregando-se um kit comercial para reações ?one step? de RT-PCR em Tempo Real. Para validação desta técnica, 36 acessos de videiras, recuperados após tratamentos de termoterapia e cultura de tecidos, foram indexados. Foi possível detectar, de maneira muito sensível e precisa, em reações simplex com amostras infectadas por diferentes isolados, todos os vírus supracitados, a exceção do GLRaV-1. Também foi possível detectar em ensaios duplex, o GVA, GRSPaV, GLRaV-2 e GLRaV-3 (com sondas marcadas com o fluoróforo VIC e ?quencher? TAMRA) combinados com o GVB, GFLV, GFkV, GVD e GLRaV-5 (FAM/TAMRA). Já as reações triplex somente foram possíveis a partir de cDNA viral clonado. Na indexação dos 36 acessos, o status fitossanitário dos materiais avaliados foi considerado muito bom. Dez plantas de videira, por tratamento, cvs. Cabernet Franc e C. Sauvignon, com e sem sintomas de infecção viral, foram avaliadas agronomicamente. Em ambas cvs. detectou-se o GRSPaV e GVB, por meio de RT-PCR em Tempo Real, nas plantas avaliadas. Foram verificadas diferenças significativas, em favor das plantas sem sintomas, para muitas das variáveis agronômicas avaliadas. Adicionalmente, objetivou-se: (a) estender a caracterização molecular de um isolado local de GFkV e (b) realizar a caracterização molecular de isolados locais do GVD e GLRaV-5. Os fragmentos de DNA amplificados foram clonados e sequenciados. Além desta caracterização, foram  indexados, por meio de RT-PCR em Tempo Real, 37 acessos de videira para o GFkV, GVD e GLRaV-5. Adicionalmente, três fragmentos de DNA de GLRaV-1 e GVA, amplificados com oligonucleotídeos utilizados nas reações de RT-PCR em  Tempo Real, foram sequenciados na tentativa de elucidar resultados, parcialmente negativos. As sequências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzidos dos genes da proteína capsidial (CP) do GFkV, da CP e da ?RNA binding protein? (GVD) e do  gene parcial da HSP70 do GLRaV-5 foram obtidas para isolados locais. Foi possível detectar estes vírus em 20 (GVD), 7 (GLRaV-5) e 6 (GFkV) amostras avaliadas. A presença do GVD ainda não havia sido relatada no Brasil e o GLRaV-5 havia sido detectado, apenas por meio de sorologia, no Estado de São Paulo. A análise das sequências dos fragmentos de DNA do GLRaV-1 e GVA permitiu propor explicações sobre resultados obtidos. A RT-PCR em Tempo Real (TaqMan) aporta sensibilidade e especificidade ao diagnóstico viral, sendo uma importante ferramenta na indexação de materiais propagativos de videira, capaz de detectar, eficientemente, diferentes espécies e isolados virais. A caracterização molecular de isolados locais contribuiu no sentido de apoiar a definição dos oligonucleotídeos e das sondas visando maior eficiência desta técnica.	
Palavras-Chave: 	Caracterização molecular; PCR em Tempo Real; TaqMan.	
Thesagro: 	Doença de planta; Uva; Vírus; Viticultura.	
Categoria do assunto: 	--	
Registro original: 	Embrapa Uva e Vinho (CNPUV)	
Exemplares: 	CNPUV - (14467-1) - UPA - AP - DD - Online -  -  - REP
CNPUV - (14467-2) - UPA - TS - PP - TS00461 -  - TS00461 - DIS