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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
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Data corrente: |
28/01/2011 |
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Data da última atualização: |
22/02/2011 |
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Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. |
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Afiliação: |
CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS; BOLSISTA CNPGC; RENATO ANDREOTTI E SILVA, CNPGC; CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS. |
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Título: |
Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. |
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Ano de publicação: |
2010 |
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Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. |
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Páginas: |
1 p. |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
A proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. MenosA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Bm86-CG; Precipitação. |
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Thesagro: |
Proteína. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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Marc: |
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260 $c2010
300 $a1 p.
520 $aA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo.
650 $aProteína
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773 $tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM.
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Registro original: |
Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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| Registros recuperados : 62 | |
| 3. |  | MARTINS, A. G. G. M.; SIHLER, W.; DIAS, S. C.; SOUZA, M. L. Construção de baculovirus recombinante para expressão de inibidor alpha-amilase BIII isolado de centeio. In: ENCONTRO DO TALENTO ESTUDANTIL DA EMBRAPA RECURSOS GENÉTICOS E BIOTECNOLOGIA, 9., 2004, Brasília, DF. Anais: resumos dos trabalhos. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2004. p. 54.| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 4. | | BONFIM, K.; SILVA, S. F.; SILVA-WERNECK, J. O.; DIAS, S. C.; MONNERAT, R. G. Caracterização bioquimica e molecular de isolados de Bacillus thuringiensis patogênicos para insetos. In: WORKSHOP DO TALENTO ESTUDANTIL DA EMBRAPA RECURSOS GENÉTICOS E BIOTECNOLOGIA, 4., 1999, Brasília. Anais: resumos dos trabalhos. Brasília, DF: EMBRAPA-CENARGEN, 1999. p. 121.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso | Circulação/Nível: -- - -- |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 6. | | NAKASU, E. Y. T.; FIRMINO, A. A. P.; DIAS, S. C.; GROSSI-de-SÁ, M. F. Identificação de receptores do bicudo do algodoeiro (Anthonomus grandis) para toxinas cry. In : ENCONTRO DO TALENTO ESTUDANTIL DA EMBRAPA RECURSOS GENÉTICOS E BIOTECNOLOGIA, 12., 2007, Brasília, DF. Anais: resumos dos trabalhos. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2007. p. 71.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 7. | | SISSON, D.; SIHLER, W.; DIAS, S. C.; FALCÃO, R.; FONTES, E. M. G.; SOUZA, M. L. Efeito do inibidor alpha-amilase BIII de centeio em baculovirus recombinante ocluso positivo. In: SIMPÓSIO DE CONTROLE BIOLÓGICO, 10., 2007, Brasília, DF. Inovar para preservar a vida. Resumos. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2007. (Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Documentos, 250). ID 414.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 8. | | DIAS, S. C.; BROD, C.; SUJII, E. R.; FONTES, E. M. G.; PIRES, C. S. S. Protocolo para avaliação dos efeitos de proteínas tóxicas a insetos-praga sobre a abelha sem ferrão Trigona spinipes (Hymenoptera, Apidae, Meliponina). Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2007. 29 p. (Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Boletim de pesquisa e desenvolvimento, 197).| Tipo: Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 9. | | MULINARI, F.; MULINARI, E.; DIAS, S. C.; CARLINI, C. R.; SA, M. F. G. de. Transformação de tabaco (Nicotiana tabacum) com o peptídeo inseticida jaburetox-2. In: ENCONTRO DO TALENTO ESTUDANTIL DA EMBRAPA RECURSOS GENÉTICOS E BIOTECNOLOGIA, 15., 2010, Brasília, DF. Anais: resumos dos trabalhos. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2010. Resumo 035.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 10. | | NOBRE, S. D. N.; SUJII, E. R.; SCHIMIDT, F. G. V.; DIAS, S. C.; LAUMAN, R.; MONNERAT, R. G. Bionomia do bicudo do algodoeiro criado em dieta artificial. In: WORKSHOP DO TALENTO ESTUDANTIL DA EMBRAPA RECURSOS GENÉTICOS E BIOTECNOLOGIA, 4., 1999, Brasília. Anais: resumos dos trabalhos. Brasília, DF: EMBRAPA-CENARGEN, 1999. p. 120.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso | Circulação/Nível: -- - -- |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 11. | | SIHLER, W.; SISSON, D.; MARTINS, A. G. M.; DIAS, S. C.; FONTES, E. M. G.; SOUZA, M. L. Construction of recombinant baculovirus expressing the protein inhibitor alpha-amilase BIII isolated from rye seeds. Virus Reviews & Research, v. 11, suppl. 1, p. 111, Nov. 2006. Edição dos Resumos do 17 Encontro Nacional de Virologia, Campos do Jordão, 2006.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 12. | | DIAS, S. C.; SAGARDOY, M. A.; SILVA, S. F.; TOSTES, A. N.; DIAS, J. M. C. S. Caracterizacion serologica y evaluacion de la patogenicidad de Bacillus thuringiensis y Bacillus sphaericus aislados de suelos argentinos. In: SIMPOSIO DE CONTROLE BIOLOGICO, 5., 1996, Foz do Iguacu, PR. Anais: sessao de posters. Londrina: EMBRAPA-CNPSO, 1996. p.82.| Biblioteca(s): Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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| 14. | | NAKASU, E. Y. T; FIRMINO, A. A. P.; DIAS, S. C.; OLIVEIRA, G. R.; GROSSI DE SÁ, M. F. Estratégias para identificação e caracterização de receptores do bicudo do algodoeiro (Anthonomus grandis) para toxinas Cry. In: WORKSHOP INTERAÇÃO MOLECULAR PLANTA-PRAGAS, 2., 2007, Brasília, DF. II Workshop Interação Molecular Planta-Praga. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2007. p. 66-70. (Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Documentos, 229).| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
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| 18. | | COSTA, T. G.; CRUZ, A. S. de P.; SOUSA, T. C. de; MICHEL, T.; DIAS, S. C.; ENGLER, J. de A.; ROCHA, T. L. Allelopathic interactions of Solanum stramonifolium Jacq. might be used for Meloidogyne incognita management. Journal of Agricultural Science, v. 15, n. 9, p. 76-94, 2023.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 3 |
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