Data/hora: 16/06/2024 02:21:33

Biblioteca(s): | Embrapa Caprinos e Ovinos.
Data corrente: | 14/10/2004
Data da última atualização: | 29/08/2023
Autoria: | PINHEIRO, R. R.; OLORTEGUI, C. C.; GOUVEIA, A. M. G.; ARAÚJO, S. C.; BOHORQUES, K.
Afiliação: | Embrapa Caprinos.
Título: | Purificação de antígenos do lentivirus caprino por coluna de afinidade.
Ano de publicação: | 2002
Fonte/Imprenta: | In: CONGRESSO BRASILEIRO DE MEDICINA VETERINÁRIA, 29., 2002, Gramado, RS. Saúde ambiental, animal e humana: uma questão de sobrevivência: anais. Gramado: Sociedade Brasileira de Medicina Veterinária, 2002. 1 CD ROM.
Idioma: | Português
Conteúdo: | No processo de purificação das proteínas dos lentivírus para produção de antígenos (Ags) ocorrem perdas principalmente das glicoproteinas por serem relativamente instáveis. Optou-se pela utilização de cromatografia em coluna de afinidade na purificação de proteínas do lentivírus caprino (LVC). No preparo da coluna de afinidade utilizou-se soro de caprinos positivo ao teste de microimunodifusão em gel de ágar (MIDGA) e pool de lotes de soro reagente integrante do kit comercial. A IgG foi obtida por precipitação em sulfato de amônio. A coluna foi preparada com proteina A imobilizada em sefarose CL-4B. Foi purificado o antígeno lote 1 (AgL1) obtido por concentração do sobrenadante de subcultivos de células de membrana sinovial caprina infectadas com LVC. O antigeno comercial (Agkit), AgL1 e o antígeno purificado (AgL1CA) foram submetidos a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), immunoblotting e ELISA indireto. Na eletroforese verificou-se no AgL1CA quatro proteínas de peso molecular (PM) aproximado: 8OkDa, 70kDa, 55kDa e 27kDa. No immunoblotting verificou-se que todos os Ags apresentaram uma banda de aproxitnadanente 27 kDa, sendo que, no AgL1CA ela foi mais intensa. No AgL1CA e AgL1 constatou-se outra banda de PM aproximado de 48 kDa, entretanto sendo bem mais forte no AgL1CA. No AgL1 observou-se, tanbém, uma banda com 70 kDa. Verificou-se, também, a presença da glicoproteina com PM variando de 140 a 145 kDa em todos os antígenos. Nos AgL1 e AgL1CA observou-se, ainda, uma banda de PM de 19kDa. Comparando as bandas observadas por SDS-PAGE com as do immunoblotting, pode-se verificar que nos AgKit e AgL1 somente a proteína p28 apareceu nitidamente. No ELISA indireto utilizando o AgL1CA observou-se que a diluição do soro de 1:200 e 200ng de antígeno apresentou uma diferença, entre as densidades ópticas do pool de soros positivos e negativos, de aproximadamente O,5 que viabiliza o desenvolvimento deste teste. Diante dos resultados verificou-se que o uso da cromatografia de afinidade é uma alternativa viável na obtenção de antígenos altamente purificados.
Thesagro: | Antígeno; Caprino.
Thesaurus Nal: | Antigens; Goats; Lentivirus.
Categoria do assunto: | H Saúde e Patologia
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/44585/1/RAC-Purificacao-de-antigenos.pdf
Registro original: | Embrapa Caprinos e Ovinos (CNPC)
Exemplares: | CNPC - (17216-1) - UPC - RA - DD - SP 05380 -  - SP 05380 - DIS