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Biblioteca(s): | Embrapa Pecuária Sudeste.
Data corrente: | 18/10/2007
Data da última atualização: | 10/08/2011
Autoria: | IBELLI, A. M. G.; ANDRÉO, R.; COUTINHO, L. L.; GOUVEIA, J. J. S.; NAKATA, L. C.; OLIVEIRA, M. C. de S.; SOUZA, J. R. T.; ZAROS, L. G.; REGITANO, L. C. de A.
Afiliação: | ADRIANA MÉRCIA G. IBELLI, UFSCar/SÃO CARLOS, SP.; R. Andréo, ESALQ/USP/PIRACICABA,SP.; LUIZ L. COUTINHO, ESALQ/USP/PIRACICABA,SP.; J. J. S. Gouveia, UFSCar/SÃO CARLOS, SP.; L. C. Nakata, ESALQ/USP/PIRACICABA, SP.; MARCIA CRISTINA DE SENA OLIVEIRA, CPPSE; J. R. T. Souza, UNICEP/SÃO CARLOS, SP.; L. G. Zaros, CENTEC; LUCIANA CORREIA DE ALMEIDA REGITANO, CPPSE.
Título: | Seleção de genes constitutivos para estudos de expressão gênica em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos
Ano de publicação: | 2007
Fonte/Imprenta: | In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 53., 2007, Águas de Lindóia, SP. Anais... Águas de Lindóia: SBG, 2007.
Páginas: | p. 151
Idioma: | Português
Conteúdo: | A quantificação de RNA mensageiro é amplamente utilizada em estudos de expressão gênica. O método de reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real é um dos mais sensíveis e eficientes para examinar os padrões de expressão. Para que se tenha uma análise confiável, a escolha de genes constitutivos estáveis é essencial. Estes genes devem apresentar expressão constante, independentemente do tecido ou tratamento utilizado. Isto permite a normalização de diferenças existentes na quantidade inicial de RNA, em possíveis variações experimentais e na síntese de cDNA. Diversos genes como GAPDH, RNA ribossômico 18S e actinas são empregados, porém variações já foram observadas, sugerindo que nenhum gene possa ser considerado estável para todas as condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estável em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos. Dez bezerros da raça Nelore foram mantidos livres de infecções por parasitos desde o nascimento. Esses animais foram separados em dois grupos: 5 animais submetidos a infecção artificial com larvas de Haemonchus spp (grupo tratamento) e 5 animais livres de infecção (grupo controle). A coleta de amostras de tecidos e linfonodos abomasais foi feita sete dias após a infecção. O isolamento do RNA total foi feito com reagente Trizol (Invitrogen) e síntese de cDNA por transcrição reversa. A quantificação dos genes RPL-19, GAPDH e HPRT-1 foi avaliada pela técnica de RT-PCR em tempo real utilizando SYBR Green como corante. As análises referentes às quantificações foram realizadas com os valores de Ct obtidos para cada gene. A fim de verificar possíveis variações entre os genes, foram utilizados os programas Analyse-it (Excel), o teste não paramétrico Randomisation test e o programa de normalização Genorm. Os resultados mostraram que para linfonodo abomasal os genes RPL-19 e GAPDH não apresentaram expressão diferencial entre os tratamentos (p>0,05), enquanto que HPRT-1 foi diferencialmente expresso (p<0,05) no teste não paramétrico Randomisation test. Entre os genes RPL-19 e GAPDH os valores de desvio e erro padrão foram 1,23, 0,39 e 2,24 e 0,71, respectivamente. Para abomaso, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais para nenhum dos três genes analisados e o gene RPL-19 apresentou o menor desvio e erro padrão (2,34 e 0,74, respectivamente). A análise realizada pelo programa Genorm mostrou que para ambos os tecidos, o gene RPL-19 foi o mais estável entre os três. Desta maneira, o gene RPL-19 foi o que mostrou maior estabilidade entre os genes analisados, podendo ser empregado em estudos de expressão gênica com tecidos e linfonodos abomasais de bovinos.
Palavras-Chave: | Bovinos; Gene constitutivo; RPL-19; RT-PCR em tempo real.
Categoria do assunto: | --
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/39628/1/PROCILCAR2007.00178.pdf
Registro original: | Embrapa Pecuária Sudeste (CPPSE)
Exemplares: | CPPSE - (17203-1) - UPC - RA - PP - PROCI-2007.00178 - IBE - 2007.00178 - DIS