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Biblioteca(s): | Embrapa Mandioca e Fruticultura.
Data corrente: | 25/09/2009
Data da última atualização: | 25/09/2009
Autoria: | ANTONIOLI-LUIZON, R.; FREITAS-ASTUA, J.; LOCALI-FABRIS, E. C.; MACHADO, M. A.; KITAJIMA, E. W.
Afiliação: | Renata Antonioli-Luizon, APTA; Juliana Freitas-Ástua, CNPMF; Eliane Locali-Fabris, APTA; Marcos Antônio Machado, APTA; Elliot Watanabe Kitajima, ESALQ.
Título: | Sequenciamento parcial do vírus da pinta verde do maracujazeiro (Passion fruit green spot virus-PFGSV.
Ano de publicação: | 2008
Fonte/Imprenta: | In: ENCONTRO NACIONAL DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MICROBIOLOGIA, 3.; FÓRUM DOS COORDENADORES DOS PROGRAMAS DE MICROBIOLOGIA DA ÁREA DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS, 5.; 2008, Jaboticabal.[ Programação...]. Jaboticabal: Funep, 2008
Idioma: | Português
Conteúdo: | O Brasil é o maior produtor mundial de maracujá, cultura essa afetada por um grande número de pragas e doenças. O vírus da pinta verde do maracujazeiro (Passion fruit green spot virus - PFGSV), transmitido pelo ácaro tenuipalpídeo Brevipalpus phoenicis, caracteriza-se pela formação de pequenas manchas verdes em frutos maduros e em folhas senescentes, e lesões necróticas em ramos que podem coalescer, produzindo anelamento e morte da planta. Exames ao microscópio eletrônico de transmissão (MET) revelam a presença de partículas baciliformes em cisternas do retículo endoplasmático e viroplasma denso no citoplasma. O diagnóstico da pinta verde é feito através dos sintomas típicos (o que é pouco confiável) ou de exames ao MET (o que é demorado e de alto custo) uma vez que que não estão disponíveis antissoros ou primers para  teste  sorológicos ou moleculares. Seu controle é essencialmente preventivo através do manejo químico do ácaro. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi sequenciar parcialmente o genoma do vírus a fim de obter subsídios para classificá-lo taxonomicamente, bem como desenvolver um método rápido e confiável para o diagnóstico da doença. O dsRNA de plantas de maracujá sintomáticas para pinta verde da região de Limeira-SP foi extraído, purificado e avaliado em de gel de agarose 1%. A síntese da 1º fita de cDNA foi realizada utilizando a enzima M-MLV-RT (Invitrogen) e random primers (Invitrogen). A 2º fita foi feita utilizando a enzima DNA Polimerase I (Promega). Após a síntese da 2º fita do cDNA, foi feita uma extração com fenol: clorofórmio para limpeza da amostra e o cDNA obtido foi ligado a adaptadores, amplificado por Nested PCR e purificado em gel LMP 1%. Os fragmentos purificados foram clonados em vetor pJET2.1 (Fermentas) e inseridos em celulas competentes de Escherichia coli da linhagem DH5a por choque térmico. Os clones transformantes foram coletados em microplacas contendo meio CG acrescido de ampicilina e após seu crescimento o DNA plasmadial foi extraído. O sequenciamento foi feito no Sequenciador automático ABI 3730 (Applied Biosystems). Nas sequências, na forma de eletroesferogramas, foram exclídas as regiões referentes ao vetores e adaptadores, analisadas pelos programas "Phred, Phrap, Consed" e agrupadas em contigs. As sequencias consensos foram submetidas à consulta de similaridade com outras sequências já depositadas no banco de dados GenBank através de BLASTn e BLASTx e só foram considerados alinhamentos com e-volue inferior a 10-³. As sequencias do PFGSV evidenciaram similaridade com regiões codificadoras da replicase (rep) e proteína de movimento (mp) do vírus da leprose dos citros (Citrus leprosis virus cytoplasmic type - CiLV-C), membro-tipo do recém-criado gênero Cilevirus e que apresenta morfologia, efeitos citopáticos e vetor semelhantes ao PFGSV. Foram desenhados primers para uma região da mp, que só amplificam amostras sintomáticas para pinta verde. Em conclusão, foram obtidas as primeiras sequências genômicas do PFGSV, o que deverá contribuir para a sua classificação taxonômica e gerar um método confiável para o diagnóstico da doença.
Palavras-Chave: | Biblioteca de cDNA; Sequenciamento de vírus.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Mandioca e Fruticultura (CNPMF)
Exemplares: | CNPMF - (25886-1) - UPC - SP - -- - SP12794 -  - 12794 - DIS