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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Agroindústria Tropical. |
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Data corrente: |
19/12/2018 |
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Data da última atualização: |
30/01/2019 |
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Tipo da produção científica: |
Orientação de Tese de Pós-Graduação |
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Autoria: |
SOUSA, A. J. S. |
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Afiliação: |
Antônio Juscelino Sudário Sousa, Universidade Federal do Ceará. |
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Título: |
Uma quitinase termoestável de chromobacterium violaceum atcc 12472 expressa em escherichia coli e que inibe a germinação de conídios de dois fungos fitopatogênicos isolados do abacaxi ornamental. |
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Ano de publicação: |
2018 |
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Fonte/Imprenta: |
2018 |
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Páginas: |
113 p. |
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Idioma: |
Português |
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Notas: |
Tese (Doutorado em Bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza. Orientador: Thalles Barbosa Grangeiro. |
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Conteúdo: |
Chromobacterium violaceum é uma β-proteobactéria Gram-negativa, saprófita, anaeróbia facultativa e de vida livre. Essa bactéria habita vários ecossistemas nas regiões tropicais e subtropicais do mundo, principalmente em amostras de água ou de solo úmido. Ela caracteriza-se também por possuir um versátil metabolismo energético, fazendo uso de inúmeras enzimas que possibilitam a utilização de variadas fontes de energia. No genoma da C. violaceum foram identificadas diversas ORFs (open reading frames), codificando proteínas supostamente responsáveis por mediar a interação de C. violaceum com os vários elementos presentes nos ambientes em que ela habita. Entre estas proteínas, estão várias quitinases. Quitinases são enzimas capazes de hidrolisar a quitina, que é um polissacarídeo composto por resíduos de N-acetil-β-D-glucosamina unidos por ligações O-glicosídicas do tipo β- (1,4). Neste trabalho, o objetivo foi expressar uma quitinase (CV1440) de C. violaceum ATCC 12472 em E. coli, purificar a proteína recombinante e caracterizá-la em relação a aspectos bioquímicos e biológicos. A sequência codificada pela ORF CV1440 foi amplificada por reação em cadeia da DNA polimerase (PCR) e adicionada ao cassete de expressão do plasmídeo pET303/CT-His. O plasmídeo recombinante foi clonado em E. coli TOP10F' e posteriormente introduzido em E. coli BL21(DE3) para expressão. A proteína recombinante foi secretada para o meio de cultura, via peptídeo sinal endógeno. A quitinase foi então purificada a partir do meio livre de células por precipitação com sulfato de amônio (95% de saturação), cromatografia de afinidade a quitina, seguida de uma cromatografia de afinidade a níquel imobilizado em matriz de Sepharose. Quando submetida a eletroforese em condições desnaturantes (SDS- PAGE), a proteína purificada apresentou uma única banda com massa molecular aparente de cerca de 46 kDa. A identidade dessa banda como correspondendo à quitinase CV1440 foi confirmada por espectromeria de massas. O rendimento do produto recombinante purificado foi de aproximadamente 3 mg por litro de cultura. A quitinase recombinante purificada apresentou atividade ótima em pH 5,0, e apresentou uma temperatura ótima de 60 oC, foi moderadamente estavel a variação de pH e elevadamente estavel a variações de temperatura, mantendo mais de 50% da atividade quitinolítica após incubação a 100 oC por 1 hora. A atividade da enzima foi afetada negativamente pelos íons Cu+2, Hg+2, La+3 e Fe+2 e pelos agentes químicos DTT, β-mercaptoetanol, e SDS, porém não houve aumento de atividade na presença de outros íons, bem como, na presença do quelante EDTA, sugerindo que a enzima não possui cofator. A enzima conseguiu inibir a germinação de conídios dos fungos fitopatogênicos Fusarium oxysporum e F. proliferatum. Ensaios de microscopia de força atômica revelaram alterações mORFológicas pronunciadas na superfície de esporos incubados com CvChi47 quando comparados aos conídios não tratados com a enzima. Juntos, esses resultados indicam a possibilidade de utilização futura da quitinase codificada pela ORF CV1440 como uma potencial ferramenta no controle de fungos fitopatogênicos. MenosChromobacterium violaceum é uma β-proteobactéria Gram-negativa, saprófita, anaeróbia facultativa e de vida livre. Essa bactéria habita vários ecossistemas nas regiões tropicais e subtropicais do mundo, principalmente em amostras de água ou de solo úmido. Ela caracteriza-se também por possuir um versátil metabolismo energético, fazendo uso de inúmeras enzimas que possibilitam a utilização de variadas fontes de energia. No genoma da C. violaceum foram identificadas diversas ORFs (open reading frames), codificando proteínas supostamente responsáveis por mediar a interação de C. violaceum com os vários elementos presentes nos ambientes em que ela habita. Entre estas proteínas, estão várias quitinases. Quitinases são enzimas capazes de hidrolisar a quitina, que é um polissacarídeo composto por resíduos de N-acetil-β-D-glucosamina unidos por ligações O-glicosídicas do tipo β- (1,4). Neste trabalho, o objetivo foi expressar uma quitinase (CV1440) de C. violaceum ATCC 12472 em E. coli, purificar a proteína recombinante e caracterizá-la em relação a aspectos bioquímicos e biológicos. A sequência codificada pela ORF CV1440 foi amplificada por reação em cadeia da DNA polimerase (PCR) e adicionada ao cassete de expressão do plasmídeo pET303/CT-His. O plasmídeo recombinante foi clonado em E. coli TOP10F' e posteriormente introduzido em E. coli BL21(DE3) para expressão. A proteína recombinante foi secretada para o meio de cultura, via peptídeo sinal endógeno. A quitinase fo... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
CV1440. |
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Thesagro: |
Escherichia Coli; Fusarium Oxysporum. |
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Thesaurus Nal: |
Atomic force microscopy; Chromobacterium violaceum; Fusarium proliferatum. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/188981/1/Tese-Antonio-.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Agroindústria Tropical (CNPAT) |
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| 161. |  | OLIVEIRA, V. R. de; SANTOS, C. A. F.; NASCIMENTO, C. E. de S.; DRUMOND, M. A. Recursos genéticos. In: DRUMOND, M. A.; AIDAR, S. de T.; NASCIMENTO, C. E. de S.; OLIVEIRA, V. R. de (Ed.). Umbuzeiro: avanços e perspectivas. Petrolina: Embrapa Semiárido, 2016. cap. 3, p. 81-116.| Tipo: Capítulo em Livro Técnico-Científico |
| Biblioteca(s): Embrapa Semiárido. |
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| 162. | | MORAIS, T.; OLIVEIRA, J.; SILVA, E.; MELO, N. F. de; DRUMOND, M. A.; MELO, A. Y. Resposta do pinhão manso à micorrização em diferentes tipos de solo do semi-árido. In: ENCONTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL, 11.; SIMPÓSIO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, DO SOLO, 10; . 2008, Fortaleza. Resumos exandidos... Fortaleza: UFC, 2008. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Semiárido. |
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| 164. | | SIMOES, W. L.; DRUMOND, M. A.; EVANGELISTA, M. R. V.; SILVA, D. J. Respostas fisiológicas do pinhão manso a diferentes lâminas de irrigação e doses de nitrogênio. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PESQUISA EM PINHÃO MANSO, 1., 2009, Brasília, DF. Pesquisa, desenvolvimento e inovação: tecnologia parabiocombústivel - anais... Brasília, DF: Embrapa Agroenergia: ABPPM, 2009. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
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| 165. | | SILVA, T. T. da; DRUMOND, M. A.; BAKKER, I. A; SILVA, S. M. da. Performance econômica e ambiental de agricultura agroflorestal e convencional no município de Nova Olinda-CE. Revista Verde de Agroecologia e Desenvolvimento Sustentável, Pombal, v. 10, n. 5, p. 85-91, dez., 2015. Edição especial.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 3 |
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| 176. | | DRUMOND, M. A.; OLIVEIRA, V. R. de; CALIXTO JUNIOR, J.; RIBASKI, J. Efeitos de diferentes espaçamentos de plantio sob o desempenho silvicultural do híbrido de Eucalyptus brassiana x E. urophylla, na Chapada do Araripe, Araripina-PE. Pesquisa Florestal Brasileira, Colombo, v. 39, (nesp), e201902043, 2019. p. 638. Edição especial dos resumos do IUFRO World Congress, 25., 2019, Curitiba.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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| 177. | | DRUMOND, M. A.; OLIVEIRA, V. R. de; TAVARES, J. A.; CALIXTO JÚNIOR, J. T.; RIBASKI, J. Efeitos de diferentes espaçamentos de plantio sob o desempenho silvicultural do hibrido de Eucalyptus brassiana x E. urophylla, na Chapada do Araripe, Araripina, PE. In: FELSEMBURGH, C. A. (Org.). Conceitos e conhecimentos de métodos e técnicas de pesquisa científica em engenharia florestal. Ponta Grossa. Atena, 2021. cap. 2, p. 7-13.| Tipo: Capítulo em Livro Técnico-Científico |
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| 178. | | MORAIS, T.; OLIVEIRA, J.; SILVA, E.; MELO, N. F. de; DRUMOND, M. A.; MELO, A. Y. Fungos micorrízicos arbusculares na rizosfera de pinhão manso (Jatropha Curcas L.) no semi-árido baiano. In: ENCONTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL, 11.; SIMPÓSIO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, DO SOLO, 10; . 2008, Fortaleza. Resumos exandidos... Fortaleza: UFC, 2008. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
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| 179. | | PAREYN, F. G. C.; ARAÚJO, E. de L.; DRUMOND, M. A. Commiphora leptophloeos: Umburana-de-cambão. In: CORADIN, L.; CAMILLO, J.; PAREYN, F. G. C. (Ed.). Espécies nativas da flora brasileira de valor econômico atual ou potencial: plantas para o futuro: região Nordeste. Brasília, DF: MMA, 2018. Cap.5, p. 746-751 il. color. (Série. Biodiversidade, 51).| Tipo: Capítulo em Livro Técnico-Científico |
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