Data/hora: 20/06/2024 13:37:21

Biblioteca(s): | Embrapa Gado de Corte.
Data corrente: | 07/02/2011
Data da última atualização: | 07/02/2011
Autoria: | FORNER, O.; ROSINHA, G. M. S.; FRAGOSO, S. P.; SANTOS, L. R.; SOARES, C. O.; ARAUJO, F. R.; ELISEI, C.
Afiliação: | ODINÉIA FORNER, UFPR; GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC; FIIOCRUZ; BOLSISTA CNPGC; CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC; FLABIO RIBEIRO ARAUJO, CNPGC; BOLSISTA CNPGC.
Título: | FagA (Gene de aquisição de ferro) de Corynebacterium pseudotuberculosis como candidato a vacina de dna contra a linfadenite caseosa
Ano de publicação: | 2010
Fonte/Imprenta: | In: JORNADA CIENTÍFICA DA EMBRAPA GADO DE CORTE, 6., 2010, Campo Grande, MS. Ética na pesquisa científica: [Anais da ...]. Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2010. 1 CD-ROM. Coordenadora: Vanessa Felipe de Souza
Páginas: | 1 p.
Idioma: | Português
Conteúdo: | A linfadenite caseosa (LC) é uma doença que acomete ovinos e caprinos, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. Ainda não há uma imunoprofilaxia eficiente contra este patógeno, provavelmente pelo escasso conhecimento de seus fatores de virulência. O gene fagA codifica uma proteína de membrana envolvida na aquisição de ferro para bactéria. Este gene foi identificado a partir da imunovarredura de uma biblioteca genômica de C. pseudotuberculosis utilizando soros de ovinos infectados com este patógeno, sugerindo o fagA como um bom candidato a antígeno vacinal. O objetivo neste trabalho foi construir um plasmídeo vacinal com o gene fagA e determinar a presença de mensagem para este gene em músculos de camundongos inoculados e em células de mamíferos COS-7 transfectadas com o plasmídeo vacinal denominado fagApcDNA. Primers foram desenhados para o gene fagA, gerando um fragmento de 1068 pb que foi clonado no vetor pcDNA3.1+ (Invitrogen®), transformado em cepas de Escherichia coli DH5? e purificado com Endofree Plasmid Giga KitTM (QIAGEN®). Para detecção de mensagem para fagA dois experimentos foram realizados. No primeiro, dois camundongos da linhagem Balb-C, com 9 semanas, receberam uma injeção intramuscular de 100 ?g de fagApcDNA, sendo um deles eutanasiado após 48 horas (M1) e o outro após 72 horas (M2) de inoculação. Depois, 100 mg do tecido alvo da injeção foram retirados e macerados com trizol. No segundo experimento, células COS-7 foram transfectadas com 2 ?g de fagApcDNA misturado ao reagente Cellfectin (Invitrogen®). Em seguida, as células foram ressuspensas em trizol e posteriormente, células e tecido foram processados para obtenção do RNA total, usado na detecção da mensagem para fagA por RT-PCR (ImProm-II? Reverse Transcription System ? Promega®). Como resultado preliminar, verificou-se a expressão de fagA apenas em M1. Porém, novos experimentos serão realizados para confirmar fagApcDNA como um bom candidato para uma vacina de DNA contra a LC.
Palavras-Chave: | Caprinos; Ovinos.
Thesagro: | Corynebacterium Pseudotuberculosis.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Gado de Corte (CNPGC)
Exemplares: | CNPGC - (13620-1) - UPC - PL - DD - CD-142 - JOR -  - DIS