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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Agrobiologia. |
Data corrente: |
10/11/2005 |
Data da última atualização: |
11/01/2010 |
Autoria: |
GITAHY, P. de M.; LIMA, G. M. de S.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; DE SOUZA, M. T.; BALDANI, J. I. |
Título: |
Purificação de DNA plasmidial de Bacillus thuringiensis por ultracentrifugação em gradiente de cloreto de césio. |
Ano de publicação: |
2005 |
Fonte/Imprenta: |
Seropédica: Embrapa Agrobiologia, 2005. |
Páginas: |
20 p. |
Série: |
(Embrapa Agrobiologia. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 8). |
ISSN: |
1676-6709 |
Idioma: |
Português |
Notas: |
Plasmid DNA purification of Bacillus thuringiensis by ultracentrifugation in cesium chloride gradient. |
Conteúdo: |
DNA plasmid. Bacillus thuringiensis e seus plasmídeos. Purificação de DNA plasmidial por ultracentrifugação em gradiente de cloreto de césio (CsCl). Estirpes utilizadas neste trabalho. Condições de crescimento e extração de DNA plasmidial. Preparo do DNA plasmidial e ultracentrifugação gradiente de CsCl. Identificação e coleta das bandas de interesse. Análise eletroforética. Bacillus thuringiensis é uma bacteria que sintetiza delta-endotoxinas letais para diferentes grupos de insetos, sendo a maior responsável pelo mercado ,mundial de bioinseticidas. As proteínas tóxicas são codificadas por genes denomonados cry, presentes em plasmídeos conjugativos com mais de 30 Mda, e que geralmente, são difíceis de serem purificados pelos métodos rotineiros de extração e purificação. O objetivo deste trabalho foi ajustar um metodologia para obtenção dos plasmídeos presentes nas estirpes de B. thuringiensis, a partir da técnica de ultracentrifugação em gradiente de cloreto de césio. Neste caso, foram usados como modelo as estirpes HD-1 e S76 da subespécies kurstaki. O método de lise alcalina e purificação em gradiente de cloreto de césio empregado, permitiu a obtenção de grandes quantidades de DNA plasmidial com alto grau de pureza. Foram realizadas adaptações no protocolo original que tornaram o protocolo utilizado para as estirpes HD-1 e S76 uma técnica menos laboriosa e mais rápida. Ainda houve redução significativa na quantidade de brometo de etídeo empregada e na quantidade de resíduos químicos sólidos contaminados com essa substância, extremamente tóxica, que foram usados no processo. O procedimento de purificação descrito fio um método adaptado para purificação dos pequenos e grandes plasmídeos de B. thuringiensis e foi usado com sucesso para as estirpes HD-2 e S76. Bacillus thuringiensis is a Gram positive bacterium that synthesizes delta-endotoxinas lethal to different groups of insects therefore has been the largest responsible for the worlf market of bioinseticidas. The toxic proteins are coded by genes denominated cry, persents in conjugatives plasmids with more than 30 Mda and that generally are difficult to be purified by the routine methods of extraction and purification. The objective of this work was to adjust the ultracentrifugation methodology in gradient of cesium chloride to obtain purified plasmids in HD-1 and S76 strains of B. thuringiensis subsp. Kurstaki. The procedure allwed to obtain great amounts of plasmids DNA from HD-1 and S76 strains with high degree of purity. In addition, it was less laborious and much faster. Besides, there was significant reduction in the amounts of ethidium bromide and of solid chemical residues contaminated with the toxic substance. The described protocol is a modification of a purification method for small and big plasmids of B. huringiensis strains and could be applied with sucess for strains the HD-1 and S76. MenosDNA plasmid. Bacillus thuringiensis e seus plasmídeos. Purificação de DNA plasmidial por ultracentrifugação em gradiente de cloreto de césio (CsCl). Estirpes utilizadas neste trabalho. Condições de crescimento e extração de DNA plasmidial. Preparo do DNA plasmidial e ultracentrifugação gradiente de CsCl. Identificação e coleta das bandas de interesse. Análise eletroforética. Bacillus thuringiensis é uma bacteria que sintetiza delta-endotoxinas letais para diferentes grupos de insetos, sendo a maior responsável pelo mercado ,mundial de bioinseticidas. As proteínas tóxicas são codificadas por genes denomonados cry, presentes em plasmídeos conjugativos com mais de 30 Mda, e que geralmente, são difíceis de serem purificados pelos métodos rotineiros de extração e purificação. O objetivo deste trabalho foi ajustar um metodologia para obtenção dos plasmídeos presentes nas estirpes de B. thuringiensis, a partir da técnica de ultracentrifugação em gradiente de cloreto de césio. Neste caso, foram usados como modelo as estirpes HD-1 e S76 da subespécies kurstaki. O método de lise alcalina e purificação em gradiente de cloreto de césio empregado, permitiu a obtenção de grandes quantidades de DNA plasmidial com alto grau de pureza. Foram realizadas adaptações no protocolo original que tornaram o protocolo utilizado para as estirpes HD-1 e S76 uma técnica menos laboriosa e mais rápida. Ainda houve redução significativa na quantidade de brometo de etídeo empregada e na quantidade de resídu... Mostrar Tudo |
Thesagro: |
Ácido Nucléico; Bactéria; DNA. |
Categoria do assunto: |
-- |
URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/CNPAB-2010/32963/1/bot008.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Agrobiologia (CNPAB) |
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Registros recuperados : 77 | |
45. | | GALISA, P. de S.; VIDAL, M. S.; BALDANI, J. I.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; REIS, V. M. Identificação de genes diferencialmente expressos em cana-de-açúcar inoculadas com bactérias diazotróficas sob diferentes condições. In: SEMANA CIENTÍFICA JOHANNA DOBEREINER, 9., 19 a 23 de outubro de 2009, Seropédica. Ciência no Brasil: desafios, avanços e aplicações. Seropédica: Embrapa Agrobiologia, 2009.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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46. | | FERREIRA, V. de L.; GALISA, P. de S.; MACEDO, A. V. de M.; VIDAL, M. S.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L. Isolamento de genes diferencialmente expressos de Gluconacetobacter diazotrophicus cultivadas com diferentes fontes de carbono. In: JORNADA DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO, 18., 2008, Seropédica, RJ. Seropédica, RJ, 2008 Parceria: UFRRJTipo: Resumo em Anais de Congresso |
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48. | | GUEDES, H. V.; ROUWS, L.; OLIVEIRA, A. L. M.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; TEIXEIRA, K. R. S.; BALDANI, J. I. Selection and characterization of Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5 strain deficient in the nitrogen fixation ability and indole-acetic acid production. In: INTERNATIONAL CONGRESS ON NITROGEN FIXATION, 15th., INTERNATIONAL CONFERENCE OF THE AFRICAN ASSOCIATION FOR BIOLOGICAL NITROGEN FIXATION, 12th., 2007, Cape Town, South Africa. BNF Applications for poverty alleviation. abstracts... Cape Town: University of Technology & Sister Institutions in Cape Town, 2007. 2 p.Tipo: Resumo em Anais de Congresso | Circulação/Nível: -- - -- |
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49. | | DIAS, B. F. de O.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; RUSSO, C. A. M.; MARGIS, R.; ALVES-FERREIRA, M. Unravelling MADS-box gene family in Eucalyptus spp.: A starting point to an understanding of their developmental role in trees. Genetics and Molecular Biology, São Paulo, v. 28, n. 3, Suppl., p. 501-510, 2005.Biblioteca(s): Embrapa Agrobiologia. |
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51. | | BRASIL, M. da S.; VIDEIRA, S. S.; SIMÕES ARAÚJO, J. L.; BALDANI, V. L. D.; BALDANI, J. I. Uso da análise polifásicca para caracterização de bactérias do gênero Burkholderia. Seropédica: Embrapa Agrobiologia, 2006. 4 p. Trabalho apresentado na XXVII Reunião Brasileira de Fertilidade do Solo e Nutrição de Plantas, XI Reunião Brasileira sobre Micorrizas, IX Simpósio Brasileiro de Microbiologia do Solo; VI Reunião Brasileira de Biologia do Solo, Bonito/MS,...Biblioteca(s): Embrapa Agrobiologia. |
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52. | | GALVÃO, P. G.; MELO, L. H. V. de; GITAHY, P. M.; VIDAL, M. S.; SILVA, F. R. da; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; BALDANI, J. I. Ajuste metodológico para construção de bibliotecas e seqüenciamento de plasmídeos de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki estirpe S76. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 54., 2008, Salvador. Anais... Salvador: SBG, 2008. p. 78.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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55. | | GUEDES, H. V.; ROUWS, L. F. M.; OLIVEIRA, A. L. M.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; TEIXEIRA, K. R. dos S.; BALDANI, J. I. Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5 strain: selection and characterization of mutants deficient in nitrogen-fixation ability. In: DAKORA, F.D. et al. (Ed.). Biological nitrogen fixation: towards poverty alleviation through sustainable agriculture. Heidelberg: Springer, 2008. (Current Plant Science and Biotechnology in Agriculture, 42) Proceedings of International Nitrogen Fixation, 15th.,International Conference of the African Association for Biologica Nitrogen Fixation, 12., 2008, South Africa.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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56. | | GALVÃO, P. G.; GITAHY, P. de M.; MELO, L. H. V.; TEIXEIRA, M. S.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; BALDANI, J. I. Caracterização preliminar do plasmídeo pBt44 de Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki S76 com atividade contra a broca da cana-de-açúcar Diatraea saccharalis. In: SIMPÓSIO DE CONTROLE BIOLÓGICO, 10., 2007, Brasília, DF. Inovar para preservar a vida. Resumos. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2007. 1 p. 1 CD-ROM. SICONBIOL.Tipo: Resumo em Anais de Congresso | Circulação/Nível: -- - -- |
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57. | | CORRÊA, R. L.; SILVA, T. F.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; BARROSO, P. A. V.; VIDAL, M. S.; VASLIN, M. F. S. Molecular characterization of a virus from the family luteoviridae associated with cotton blue disease. Archives of Virology, v. 7, n. 150, p. 1357-1367, jul., 2005.Biblioteca(s): Embrapa Algodão. |
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58. | | CORRÊA, R. L.; SILVA, T. F.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; BARROSO, P. A. V.; VIDAL, M. S.; VASLIN, M. F. S. Molecular characterization of a virus from the family Luteoviridae associated with cotton blue disease. Archives of Virology, Vienna, v. 150, n. 7, p. 1357-1367, jul. 2005.Biblioteca(s): Embrapa Agrobiologia. |
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60. | | RODRIGUES, E. P.; SOARES, C. P.; SILVA, J. R.; OLIVEIRA, A. L. M.; SIMÕES-ARAÚJO, J. L.; VIDAL, M. S.; BALDANI, J. I. Mutação na região regulatória do grupo gênico tonB-exBD1D2 sugere o seu envolvimento no transporte de auxinas em Gluconacetobacter diazotrophicus. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 54., 2008, Salvador. Anais... Salvador: SBG, 2008. p.120. UFRJ; UFRRJ; UEL.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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