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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Agrobiologia. |
Data corrente: |
10/09/1999 |
Data da última atualização: |
10/09/1999 |
Autoria: |
SALLES, J. F. |
Título: |
Uso de Acetobacter diazotrophicus como vetor para expressao do gene cry3A de Bacillus thuringiensis, visando o controle de coleopteros na lavoura canavieira. |
Ano de publicação: |
1998 |
Fonte/Imprenta: |
Seropedica: UFRRJ, 1998. 64p. |
Páginas: |
64p. |
Série: |
Tese de Mestrado. |
Idioma: |
Português |
Notas: |
Tese de Mestrado. Orientada por Jose Ivo Baldani. |
Conteúdo: |
Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial de uso de bacterias diazotroficas endofiticas, como vetores para a expressao de genes cry de Bacillus thuringiensis visando controle biologico de pragas que se alimentam de tecidos internos das plantas. O Acetobacter diazotrophicus, uma bacteria diazotrofica endofitica foi usada como modelo. O gene cry3A, clonado sob o controle do promotor do gene nifHDK de Rhizobium leguminosarum biovar trifolii, foi transferido para A. diazotrophicus estirpe PAL5 atraves de conjugacao utilizando o plasmideo suicida pPBS70. Os transconjugantes foram selecionados pela sua capacidade de fixar nitrogenio em meio semi-solido sem N e formar colonias de cor chocolate em meio Batata com 10% de sacarose, caracteristicas de A. diazotrophicus. A presenca do gene cry3A no genoma de A. diazotrophicus recombinante foi detectada atraves de "Southern blot" utilizando um fragmento de 1,0kb, interno ao gene cry3A, como sonda. A producao de -endotoxina pelos transconjugantes foi detectada por "Western blot", onde uma poteina de 65kDa reagiu com o anticorpo especifico para a toxina de B. thuringiensis. A avaliacao da producao da -endotoxina mostrou que a expressao do gene cry3A era dependente do processo de fixacao de nitrogenio pois este gene esta fusionado a um promotor nif. Analises de microscopia eletronica de transmissao revelaram que nao ocorre cristalizacao da proteina Cry3A nas celulas de A. diazotrophicus, ao contrario do que e observado em B. thuringiensis. Resultados preliminares de bioensaio mostraram que a endotoxina produzida pelos transconjugantes de A. diazotrophicus causou 60% de mortalidade em larvas de Migdolus spp., sugerindo que esta bacteria transgenica pode ser usada como vetor para expressar genes com atividade entomopatogenica, visando o controle de pragas de cana-de-acucar, como Migdolus spp. The goal of this study is to evaluate the potential of endophytic diazotrophic bacteria, as a vector to express a cry gene from Bacillus thuringiensis inside plant tissue, envisiging the control of pests that attack sugar cane plants. Acetobacter diazotrophicus, an endophytic nitrogen-fixing bacterium was used as a model. The cry3A gene, cloned on the nifHDK gene promoter from Rhizobium leguminosarum biovar trifolii, was transferred to A. diazotrophicus by conjugation using a suicide plasmid. Transconjugants were selected by the ability to fix nitrogen in semi-solid N-free medium and the chocolate characteristic colour displayed by the colonies formed in Potato Agar medium containing 10% sucrose. The presence of the cry gene was detected by Southern-blot using an internal fragment of 1,0kb as a probe. The production of -endotoxin by the recombinant strain was detected by Western-blot, with a 65kDa protein band reacting with the specific antibody raised against the B. thuringiensis toxin. Evaluation of the -endotoxin production showed that the expression of the cry3A gene was dependent on the nitrogen fixing conditions since the genes is fused to a nit promoter. Transmission electronic microscopy analysis revealed that there is no Cry3A crystal formation in A. diazotrophicus transgenic cells, as opposed to that observed in B. thuringiensis. A preliminary bioassay showed that the -endotoxin produced by transgenic A. diazotrophicus was responsible for 60% of Migdolus spp. larvae mortality. This suggest that this endophytic diazotrophic transgenic bacterium can be used as a vector to express entomopatogenic genes envisaging the control of sugar cane pests such as Migdolus spp. MenosEste estudo teve como objetivo avaliar o potencial de uso de bacterias diazotroficas endofiticas, como vetores para a expressao de genes cry de Bacillus thuringiensis visando controle biologico de pragas que se alimentam de tecidos internos das plantas. O Acetobacter diazotrophicus, uma bacteria diazotrofica endofitica foi usada como modelo. O gene cry3A, clonado sob o controle do promotor do gene nifHDK de Rhizobium leguminosarum biovar trifolii, foi transferido para A. diazotrophicus estirpe PAL5 atraves de conjugacao utilizando o plasmideo suicida pPBS70. Os transconjugantes foram selecionados pela sua capacidade de fixar nitrogenio em meio semi-solido sem N e formar colonias de cor chocolate em meio Batata com 10% de sacarose, caracteristicas de A. diazotrophicus. A presenca do gene cry3A no genoma de A. diazotrophicus recombinante foi detectada atraves de "Southern blot" utilizando um fragmento de 1,0kb, interno ao gene cry3A, como sonda. A producao de -endotoxina pelos transconjugantes foi detectada por "Western blot", onde uma poteina de 65kDa reagiu com o anticorpo especifico para a toxina de B. thuringiensis. A avaliacao da producao da -endotoxina mostrou que a expressao do gene cry3A era dependente do processo de fixacao de nitrogenio pois este gene esta fusionado a um promotor nif. Analises de microscopia eletronica de transmissao revelaram que nao ocorre cristalizacao da proteina Cry3A nas celulas de A. diazotrophicus, ao contrario do que e observado em B. thu... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Sugar cane. |
Thesagro: |
Acetobacter; Cana de Açúcar. |
Thesaurus Nal: |
Coleoptera. |
Categoria do assunto: |
-- |
Marc: |
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11. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | BRASIL, M. S.; RODRIGUES, L. S.; SALLES, J. F.; BALDANI, V. L. D.; REIS, V. M.; BALDANI, J. I. Uso de "primers" espécie-específicos para identificação e detecção no ambiente de bactérias fixadoras de N2 do gênero Burkholderia spp. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, 22., 2003, Florianópolis. Resumos... Florianópolis: SBM, 2003. 1 p.Biblioteca(s): Embrapa Agrobiologia. |
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Biblioteca(s): Embrapa Meio Ambiente. |
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13. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | REIS, V. M.; CRUZ, G. B.; FERREIRA, A.; FERNANDES, M. F.; FERREIRA, A. C.; REIS, F. B.; RIBEIRO, J. R. A.; SALLES, J. F.; WEBER, O. B. Produção e caracterização de soros policlonais para a detecção de bactérias diazotróficas. Seropédica: EMBRAPA-CNPAB, 1997. 11 p. (EMBRAPA-CNPAB. Documentos, 30).Biblioteca(s): Embrapa Agrobiologia. |
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14. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | VIDEIRA, S. S.; SILVA, M. de C. P. e; GALISA, P. de S.; DIAS, A. C. F.; NISSINEM R.; BALDANI, V. L. D.; van ELSAS, J. D.; BALDANI, J. I.; SALLES, J. F. Culture-independent molecular approaches reveal a mostly unknown high diversity of active nitrogen-fixing bacteria associated with Pennisetum purpureum: a bionergy crop. Plant and Soil, v. 373, p. 737-754, 2013.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
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