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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Pecuária Sudeste. |
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Data corrente: |
10/11/2009 |
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Data da última atualização: |
10/05/2016 |
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Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
IBELLI, A. M. G.; RIBEIRO, A. R. B.; SOUZA, J. R. T. de; ALENCAR, M. M. de; REGITANO, L. C. de A. |
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Afiliação: |
ADRIANA MÉRCIA QUARATINI IBELLI, UFSCar; ANDREA ROBERTO BUENO RIBEIRO, SECRETARIA DA AGRICULTURA DE SÃO PAULO; JULIANA ROBERTA TORINI DE SOUZA, UNICEP/SÃO CARLOS; MAURICIO MELLO DE ALENCAR, CPPSE; LUCIANA CORREIA DE A. REGITANO, CPPSE. |
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Título: |
Escolha e padronização de um protocolo de hemólise de amostras para extração de RNA. |
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Ano de publicação: |
2009 |
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Fonte/Imprenta: |
In: JORNADA CIENTÍFICA-EMBRAPA SÃO CARLOS, 2009, São Carlos, SP. Anais... São Carlos, SP: Embrapa Pecuária Sudeste: Embrapa Instrumentação Agropecuária, 2009. Editado por Luiz Francisco Zafalon, Simone Cristina Méo Niciura. |
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Páginas: |
p. 21 |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
Estudos de regulação da expressão gênica dependem de amostras de RNA de alta pureza e integridade. A maioria das coletas de amostras para esses estudos ocorre a campo e, em grande parte das vezes, em diferentes momentos do experimento, exigindo que o transporte, a estocagem e o isolamento do RNA sejam adequados para que material de boa qualidade seja obtido. Dessa maneira, os objetivos deste trabalho foram: testar soluções de hemólise existentes na literatura e verificar a qualidade do RNA extraído após o processamento das amostras em diferentes tempos do experimento. Foram utilizadas amostras de sangue provenientes da Embrapa Pecuária Sudeste, São Carlos, SP. Em um primeiro teste, dois protocolos de obtenção de leucócitos a partir de amostras de sangue total foram avaliados. No primeiro, as amostras foram mantidas em gelo e, então, transferidas para um tubo de 15 mL, em que se adicionavam 10 mL de tampão de hemólise contendo 10 mM de Tris.HCl pH 7,6, 5 mM de MgCl2 e 10 mM de NaCl. A seguir, as amostras foram homogeneizadas e centrifugadas por 10 min a 3000 rpm, por 2 ou 3 vezes. No segundo teste, após a coleta, as amostras mantidas em gelo foram transferidas para tubo de 50 mL e centrifugadas por 5 minutos a 2500 rpm a 4oC. Após descarte do plasma, a solução de hemólise contendo 0,1444M de NH4Cl e 0,01M de NH4HCO3 foi adicionada, e as amostras foram agitadas vigorosamente, mantidas em gelo por cerca de 30 minutos e centrifugadas por 10 minutos a 3.000 rpm a 4oC. O sobrenadante foi descartado e essa etapa foi repetida uma vez. Em seguida, as extrações de RNA foram feitas seguindo o protocolo tradicional do reagente Trizol (Invitrogen). Após a escolha da melhor solução hemólise, foi realizado um segundo teste com amostras de sangue processadas 20 minutos, 1 hora, 4 horas e 8 horas após o horário inicial da coleta. Nos dois testes, as amostras foram quantificadas em espectrofotômetro Nanodrop, para verificar a qualidade e a quantidade do RNA, e após eletroforese gel de agarose 1%, para observar a integridade. Os resultados da eletroforese para o primeiro teste evidenciaram que o melhor método para obtenção de leucócitos foi com a solução de hemólise contendo NH4Cl e NH4HCO3, já que não foi observada degradação das amostras de RNA. Os resultados obtidos no segundo teste mostraram que não houve diferença na integridade do RNA após eletroforese no intervalo de tempo de 20 minutos a 8 horas entre a coleta e o processa mento das amostras, que foram sempre mantidas em gelo. O mesmo foi observado quando o RNA foi mensurado no espectrofotômetro, já que todas as amostras apresentaram razão 260/280nm maior que 1,9 e quantidades maiores que 20 ?g. Pode-se dizer, então, que amostras de sangue podem ser mantidas em gelo até 8 horas antes de serem processadas para a extração de RNA. MenosEstudos de regulação da expressão gênica dependem de amostras de RNA de alta pureza e integridade. A maioria das coletas de amostras para esses estudos ocorre a campo e, em grande parte das vezes, em diferentes momentos do experimento, exigindo que o transporte, a estocagem e o isolamento do RNA sejam adequados para que material de boa qualidade seja obtido. Dessa maneira, os objetivos deste trabalho foram: testar soluções de hemólise existentes na literatura e verificar a qualidade do RNA extraído após o processamento das amostras em diferentes tempos do experimento. Foram utilizadas amostras de sangue provenientes da Embrapa Pecuária Sudeste, São Carlos, SP. Em um primeiro teste, dois protocolos de obtenção de leucócitos a partir de amostras de sangue total foram avaliados. No primeiro, as amostras foram mantidas em gelo e, então, transferidas para um tubo de 15 mL, em que se adicionavam 10 mL de tampão de hemólise contendo 10 mM de Tris.HCl pH 7,6, 5 mM de MgCl2 e 10 mM de NaCl. A seguir, as amostras foram homogeneizadas e centrifugadas por 10 min a 3000 rpm, por 2 ou 3 vezes. No segundo teste, após a coleta, as amostras mantidas em gelo foram transferidas para tubo de 50 mL e centrifugadas por 5 minutos a 2500 rpm a 4oC. Após descarte do plasma, a solução de hemólise contendo 0,1444M de NH4Cl e 0,01M de NH4HCO3 foi adicionada, e as amostras foram agitadas vigorosamente, mantidas em gelo por cerca de 30 minutos e centrifugadas por 10 minutos a 3.000 rpm a 4oC. O sobrenada... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Protocolo. |
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Thesagro: |
Extração; RNA. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/CPPSE-2010/18749/1/PROCIMMA2009.00185.pdf
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Registro original: |
Embrapa Pecuária Sudeste (CPPSE) |
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| 6. |  | RIBEIRO, A. R. B.; PAÇO, A. L.; MAFFEI, W. E.; FEIJO, V. A.; MARCONDES, C. R. Estudo da reatividade na raça canchim com o uso de diferentes metodologias de avaliação. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE BIOÉTICA E BEM-ESTAR ANIMAL, 4., 2017, Porto Alegre, RS. Bem-estar e dor: interesse em não sofrer. Brasilia, DF: Conselho Federal de Medicina Veterinária, 2017. p. 180.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 7. | | RIBEIRO, A. R. B.; MARCONDES, C. R.; SOUZA, V. A. F. de; BÜRGNER, A. L. P. Relação entre escores de reatividade e altura do rodamoinho na face de bovinos da raça Canchim. In:ENCONTRO ANUAL DE ETOLOGIA, 36., Ouro Preto, MG. Anais... Ouro Preto, MG: SBE, 2018. p.35. Ouro Preto, MG, 15 a 18 de novembro de 2018.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 11. | | GIGLIOTI, R.; PAÇO, A. L.; RIBEIRO, A. R. B.; IBELLI, A. M. G.; CHAGAS, A. C. de S.; OLIVEIRA, M. C. de S.; OLIVEIRA, H. N. de. Avaliação do comportamento em matrizes de ovinos com diferentes níveis de infecção por helmintos gastrintestinais. In: JORNADA CIENTÍFICA-EMBRAPA SÃO CARLOS, 2009, São Carlos, SP. Anais... São Carlos: Embrapa Pecuária Sudeste: Embrapa Instrumentação Agropecuária, 2009. Editado por Luiz Francisco Zafalon, Simone Cristina Méo Niciura. (Embrapa Pecuária Sudeste. Documento 90)| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 12. | | ALENCAR, M. M. de; RIBEIRO, A. R. B.; FREITAS, A. R. de; REGITANO, L. C. de A.; IBELLI, A. M. G. Análise por componentes principais, de medidas fisiológicas de bovinos submetidos a teste de tolerâncias ao calor. In: REUNIÓN BIENAL ALPA, 21., 2009, San Juan. Producción animal em tiempos de crisis: anales... San Juan: ALPA, 2009 1 CD-ROM| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 13. | | RIBEIRO, A. R. B.; ALENCAR, M. M. de; FREITAS, A. R. de; REGITANO L. C. de A.; OLIVEIRA, M. C. de S.; IBELLI, A. M.; PAÇO, A. L. Análises exploratórias em dados de medidas fisiológicas associadas à termorregulação de bovinos puros e cruzados submetidos a teste de tolerância ao calor. In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE ZOOTECNIA, 46., 2009, Maringá. Anais...Maringa: SBZ:UEM, 2009. 1 CD-ROM| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
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| 14. | | IBELLI, A. M. G.; GIGLIOTI, R.; RIBEIRO, A. R. B.; OLIVEIRA, M. C. de S.; PAÇO, A. L.; ALENCAR, M. M. de; REGITANO, L. C. de A. Correlação entre medidas de pêlo e pelame e infestação com carrapato Rhipicephalus( Boophilus) microplus de bovino de diferentes grupos genéticos. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., Campo Grande. Anais... Campo Grqande: CBPV, 2010.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 15. | | BÜRGNER, A. L. P.; MARCONDES, C. R.; SOUZA, V. A. F. de; MAFFEI, W. E.; LEAL, S. da S.; RIBEIRO, A. R. B. Correlações entre métodos de mensuração da reatividade aplicados em bovinos da raça Canchim. In: WORKSHOP TEMPLE GRANDIN DE BEM-ESTAR ANIMAL, 1., 2018, São Paulo, SP. Anais... São Paulo: FMU, 2018. p.90-91. 18 e 19 de agosto de 2018.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 16. | | PAÇÓ, A. L.; RIBEIRO, A. R. B.; RUEDA, P.; SILVA, A. G. F. da; ROSA, A. do N.; ALENCAR, M. M. de. Correlações Genéticas entre diferentes Metodologias de Temperamento na raça Nelore1. In: SIMPÓSIO BRASILEIRO DE MELHORAMENTO ANIMAL, 10., 2013, Uberaba. Anais... Viçosa: Sociedade Brasileira de Melhoramento Animal, 2013. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
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| 18. | | CHIMENEZ, V. de O.; SANTOS, P. M.; RIBEIRO, A. R. B.; ALENCAR, M. M. de; CRUZ, G. M. da; NATEL, A. S. Comportamento em pastejo de bovinos de grupos genéticos com diferentes níveis de adaptação ao clima tropical. In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE ZOOTECNIA, 45., 2008, Lavras, MG. Anais... Lavras: SBZ: UFLA, 2008. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
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| 20. | | PERES NETTO, D.; RODRIGUES, A. de A.; FERREIRA, R. de P.; RIBEIRO, A. R. B; CHIMENEZ, V. de O.; NOGUEIRA, P. C. Comportamento diurno de vacas leiteiras em pastagem de alfafa suplementadas com silagem de milho e concentrado. 1. Variação horária em pastejo. In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE ZOOTECNIA, 46., 2009, Maringá. Anais... Maringa: SBZ:UEM, 2009. 1 CD-ROM| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
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