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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Soja; Embrapa Unidades Centrais. |
Data corrente: |
01/08/2023 |
Data da última atualização: |
03/08/2023 |
Tipo da produção científica: |
Artigo em Periódico Indexado |
Autoria: |
KOLTUN, A.; SILVA, N. V. e; ANGELOTTI-MENDONÇA, J.; MARIN, S. R. R.; GONÇALVES, L. S. A.; NEPOMUCENO, A. L.; MERTZ-HENNING, L. M. |
Afiliação: |
ALESSANDRA KOLTUN, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARINGÁ; NATHALIA VOLPI E SILVA, EMBRAPA SOJA; JÉSSIKA ANGELOTTI-MENDONÇA, EMBRAPA SOJA; SILVANA REGINA ROCKENBACH MARIN, CNPSO; LEANDRO SIMÕES AZEREDO GONÇALVES, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE LONDRINA; ALEXANDRE LIMA NEPOMUCENO, CNPSO; LILIANE MARCIA MERTZ HENNING, CNPSO. |
Título: |
CRISPR-transient expression in soybean for simplified gRNA screening in planta. |
Ano de publicação: |
2023 |
Fonte/Imprenta: |
Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 58, e03000, 2023. |
DOI: |
https://doi. org/10.1590/S1678-3921.pab2023.v58.03000 |
Idioma: |
Inglês |
Notas: |
Título em português: Expressão transiente de CRISPR em soja para triagem simplificada de gRNA na planta. |
Conteúdo: |
ABSTRACT - The objective of this work was to develop a method to create and validate CRISPR-Cas systems and different gRNAs in soybean (Glycine max) embryos. Two model genes were used for simple mutation with one gRNA or partial gene deletion with two guides. The gRNAs were inserted into the CRISPR transformation vectors by a type IIS restriction enzyme or by subcloning and inserting the promoter + gRNA2 in the final transformation vector using the classic restriction enzyme cloning method. The vectors were successfully constructed for one and two gRNAs. Agrobacterium-mediated transient transformation in soybean was carried out to test the quality of gRNAs and of the system itself (expression cassette). Simple mutation and gene deletion were detected in the embryos transformed after DNA enrichment by enzyme digestion followed by polymerase chain reaction and sequencing, which indicates that the CRISPR-Cas system and guides were working. This protocol can be used to accelerate CRISPR-based genome editing strategies for genetic transformation in soybean. RESUMO - O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método para criar e validar sistemas CRISPR-Cas e diferentes gRNAs em embriões de soja (Glycine max). Dois genes modelo foram usados para mutação simples com um gRNA ou deleção parcial do gene com dois guias. Os gRNAs foram inseridos nos vetores de transformação CRISPR por uma enzima de restrição do tipo IIS ou por subclonagem e inserção do promotor + gRNA2 no vetor de transformação final, com uso do método clássico de clonagem por enzimas de restrição. Os vetores foram construídos com sucesso para um e dois gRNAs. A transformação transiente de soja por Agrobacterium foi realizada para testar a qualidade dos gRNAs e do próprio sistema (cassete de expressão). Detectaram-se mutação simples e deleção gênica nos embriões transformados após o enriquecimento do DNA por digestão seguida de reação em cadeia da polimerase e sequenciamento, o que indica que o sistema CRISPR-Cas e os guias estavam funcionando. Este protocolo pode ser usado para acelerar as estratégias de edição de genoma baseadas em CRISPR, para transformação genética em soja. MenosABSTRACT - The objective of this work was to develop a method to create and validate CRISPR-Cas systems and different gRNAs in soybean (Glycine max) embryos. Two model genes were used for simple mutation with one gRNA or partial gene deletion with two guides. The gRNAs were inserted into the CRISPR transformation vectors by a type IIS restriction enzyme or by subcloning and inserting the promoter + gRNA2 in the final transformation vector using the classic restriction enzyme cloning method. The vectors were successfully constructed for one and two gRNAs. Agrobacterium-mediated transient transformation in soybean was carried out to test the quality of gRNAs and of the system itself (expression cassette). Simple mutation and gene deletion were detected in the embryos transformed after DNA enrichment by enzyme digestion followed by polymerase chain reaction and sequencing, which indicates that the CRISPR-Cas system and guides were working. This protocol can be used to accelerate CRISPR-based genome editing strategies for genetic transformation in soybean. RESUMO - O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método para criar e validar sistemas CRISPR-Cas e diferentes gRNAs em embriões de soja (Glycine max). Dois genes modelo foram usados para mutação simples com um gRNA ou deleção parcial do gene com dois guias. Os gRNAs foram inseridos nos vetores de transformação CRISPR por uma enzima de restrição do tipo IIS ou por subclonagem e inserção do promotor + gRNA2 no vetor de tran... Mostrar Tudo |
Thesagro: |
Genoma; Glycine Max; RNA; Soja; Vetor. |
Thesaurus Nal: |
Genetic vectors; Genome; Mutation; Polymerase chain reaction; RNA editing; Soybeans. |
Categoria do assunto: |
-- X Pesquisa, Tecnologia e Engenharia |
URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/doc/1155549/1/CRISPR-transient-expression-2023.pdf
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Marc: |
LEADER 03287naa a2200349 a 4500 001 2155606 005 2023-08-03 008 2023 bl uuuu u00u1 u #d 024 7 $ahttps://doi. org/10.1590/S1678-3921.pab2023.v58.03000$2DOI 100 1 $aKOLTUN, A. 245 $aCRISPR-transient expression in soybean for simplified gRNA screening in planta.$h[electronic resource] 260 $c2023 500 $aTítulo em português: Expressão transiente de CRISPR em soja para triagem simplificada de gRNA na planta. 520 $aABSTRACT - The objective of this work was to develop a method to create and validate CRISPR-Cas systems and different gRNAs in soybean (Glycine max) embryos. Two model genes were used for simple mutation with one gRNA or partial gene deletion with two guides. The gRNAs were inserted into the CRISPR transformation vectors by a type IIS restriction enzyme or by subcloning and inserting the promoter + gRNA2 in the final transformation vector using the classic restriction enzyme cloning method. The vectors were successfully constructed for one and two gRNAs. Agrobacterium-mediated transient transformation in soybean was carried out to test the quality of gRNAs and of the system itself (expression cassette). Simple mutation and gene deletion were detected in the embryos transformed after DNA enrichment by enzyme digestion followed by polymerase chain reaction and sequencing, which indicates that the CRISPR-Cas system and guides were working. This protocol can be used to accelerate CRISPR-based genome editing strategies for genetic transformation in soybean. RESUMO - O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método para criar e validar sistemas CRISPR-Cas e diferentes gRNAs em embriões de soja (Glycine max). Dois genes modelo foram usados para mutação simples com um gRNA ou deleção parcial do gene com dois guias. Os gRNAs foram inseridos nos vetores de transformação CRISPR por uma enzima de restrição do tipo IIS ou por subclonagem e inserção do promotor + gRNA2 no vetor de transformação final, com uso do método clássico de clonagem por enzimas de restrição. Os vetores foram construídos com sucesso para um e dois gRNAs. A transformação transiente de soja por Agrobacterium foi realizada para testar a qualidade dos gRNAs e do próprio sistema (cassete de expressão). Detectaram-se mutação simples e deleção gênica nos embriões transformados após o enriquecimento do DNA por digestão seguida de reação em cadeia da polimerase e sequenciamento, o que indica que o sistema CRISPR-Cas e os guias estavam funcionando. Este protocolo pode ser usado para acelerar as estratégias de edição de genoma baseadas em CRISPR, para transformação genética em soja. 650 $aGenetic vectors 650 $aGenome 650 $aMutation 650 $aPolymerase chain reaction 650 $aRNA editing 650 $aSoybeans 650 $aGenoma 650 $aGlycine Max 650 $aRNA 650 $aSoja 650 $aVetor 700 1 $aSILVA, N. V. e 700 1 $aANGELOTTI-MENDONÇA, J. 700 1 $aMARIN, S. R. R. 700 1 $aGONÇALVES, L. S. A. 700 1 $aNEPOMUCENO, A. L. 700 1 $aMERTZ-HENNING, L. M. 773 $tPesquisa Agropecuária Brasileira$gv. 58, e03000, 2023.
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Registro original: |
Embrapa Soja (CNPSO) |
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Registros recuperados : 218 | |
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Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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8. | | ALMEIDA, A. M. R.; SARTORI, F.; CALVO, E. S.; MARIN, S. R. R.; FUKUJI, T. S. Diferenciação morfo-bio-molecular de isolados de Cercospora kikuchii obtidos de sementes de soja, no Brasil. Fitopatologia Brasileira, v. 26, p. 328, ago. 2001. Suplemento. Resumo 224. Edição do XXXIV Congresso Brasileiro de Fitopatologia, São Pedro, SP, ago. 2001.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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9. | | MANDARINO, J. M. G.; MARIN, S. R. R.; FRANÇA-NETO, J. B. Desenvolvimento de metodologia para extração e caracterização de inibidores de trpsina presentes na soja, pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida. Informativo ABRATES, Curitiba, v. 7, n. 1/2, p. 46, jul; /ago. 1997. Número especial, ref. 025. Edição do X Congresso Brasileiro de Sementes, 1997.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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17. | | MARIN, S. R. R.; TODAKA, D.; MARUYAMA, K.; YAMAGUCHI SHINOZAKI, K.; NEPOMUCENO, A. L. Identificação de regiões promotoras de genes expressos durante déficit hídrico em cultivares de soja. Journal of Basic & Applied Genetics, Bueno Aires, v. 23, Suppl. 2012. Edição dos resumos do 15 Latin American Congress of Genetics; 41 Argentine Congress of Genetics, 45 Congress of the Chilean Society of Genetics; 2 Regional SAG-Litoral Meeting, Rosario, Oct. 2012. p. 160-161.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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19. | | SOSA-GÓMEZ, D. R.; OLIVEIRA, L. J. SILVA, J. J. da; MARIN, S. R. R.; BINNECK, E. Caracterização molecular de espécies de Scaptocoris (Hemiptera: Cydnidae). In: REUNIÃO SUL-BRASILEIRA SOBRE PRAGAS DE SOLO, 10., 2007, Dourados. Pragas-Solo-Sul: anais e ata. Dourados: Embrapa Agropecuária Oeste, 2007. 1 CD-ROM. (Embrapa Agropecuária Oeste. Documentos, 88). Organizado por: Crébio José Ávila, Rômulo Penna Scorza Júnior.Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica | Circulação/Nível: -- - -- |
Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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20. | | LEMOS, N. G.; STOLF, R.; MARIN, S. R. R.; POLIZEL, A. M.; BENEVENTI, M. A.; YAMANAKA, N.; NEPOMUCENO, A. L. Caracterização molecular pela técnica de PCR em tempo real de soja geneticamente modificada. In: CONGRESO DE SOJA DEL MERCOSUR, 3., 2006, Rosário. Mercosoja 2006: mesas científico-técnicas, resúmenes expandidos / comunicaciones. Rosário: Associación de la Cadena de Soja Argentina, 2006. p. 287-289.Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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