Data/hora: 22/06/2024 10:47:37

Biblioteca(s): | Embrapa Soja.
Data corrente: | 12/02/2009
Data da última atualização: | 19/02/2009
Autoria: | ROLLA, A. A. P.; BENEVENTI, M. A.; FUGANTI, R.; MARTINS, M. T. B.; PEREIRA, S. S.; RUBIRA, A. P. R.; MARIN, S. R. R.; FARIAS, J. R. B.; SILVEIRA, C. A.; BINNECK, E.; ABDELNOOR, V. R.; MARCELINO, F. C.; NEPOMUCENO, A. L.
Afiliação: | Amanda Alves de Paiva Rolla, UEL; Magda Aparecida Beneventi, UFRGS; Renata Fuganti, CNPSo; M. T. B. Martins, Universidade Estadual Norte do Paraná; Selma dos Santos Pereira, UEL; A. P. R. Rubira, Universidade Estadual Norte do Paraná; Silvana Regina Rock.
Título: | Quantificação do número de cópias de inserções transgenes no genoma da soja por PCR quantitativo via quantificação absoluta e relativa.
Ano de publicação: | 2008
Fonte/Imprenta: | In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 54., 2008, Salvador. Resumos... Salvador: SBG, 2008.
Páginas: | p. 277.
Idioma: | Português
Conteúdo: | O Brasil é o segundo maior produtor mundial de soja, sendo que a área cultivada com essa leguminosa vem crescendo a cada ano, com conseqüente aumento de produção. Entretanto, os níveis de produção hoje alcançados ainda podem ser melhorados. A biotecnologia tem possibilitado o desenvolvimento de organismos geneticamente modificados, que, possibilitam a solução de problemas na produção, que agregam valor aos produtos agrícolas e que, em várias situações, oferecem alternativas importantes para a melhoria na qualidade de vida humana e do ambiente. Após a obtenção de plantas GM, a caracterização molecular dos eventos constitui uma etapa essencial para a identificação das linhagens mais promissoras, que venham constituir o evento GM elite, a ser utilizado como linhagem parental no programa de melhoramento. Esta avaliação visa caracterizar a integridade da seqüência inserida no genoma da espécie, o padrão de expressão do transgene, a identificação do seu(s) sítio(s) de inserção, bem como o número de inserções do cassete de expressão. A caracterização molecular quanto ao número de cópias do transgene, bem como do sítio de inserção permite inferir sobre a estabilidade do genoma receptor após a transformação gênica. Este trabalho tem como principal objetivo desenvolver e avaliar a eficácia da quantificação de inserções de cassetes transgenes no genoma da soja utilizando a metodologia de PCR quantitativo. Serão testados dois sistemas de quantificação, um baseado em DNA genômico, que empregará a técnica de quantificação relativa pelo método do 2-AACt, e outro baseado em DNA plasmidial, para quantificação absoluta. Plasmídeos recombinantes, contendo as regiões de interesse (transgene) e parte do gene da lectina, a ser utilizado como referência endógena, clonados, serão utilizados para construção de curvas de calibração para determinação do número absoluto de cópias do transgene no genoma da soja. Para determinação da precisão dos diferentes sistemas, a técnica de Southern blotting será utilizada para comparação dos resultados. Até o momento, 6 eventos GM contendo o gene DREB 1A, tiveram o número de cópias dos cassetes transgenes quantificados via PCR QT por quantificação relativa, tendo a amostra BR16 como calibradora e gene lectina como referência endógena e por Southern blotting. De acordo com os resultados, 4 eventos tiveram o número de cópias dos cassetes determinados por PCR QT confirmados por Southern blotting. Dois eventos apresentaram número superior no PCR QT em relação ao resultado do Southern Blotting. Isso pode ser explicado devido à ocorrência de inserções em tanden dentro do genoma. Tal resultado preliminar indica a potencialidade do emprego da técnica de PCR para o screening inicial de plantas GM para seleção de eventos com baixo número de cópias, e, conseqüentemente, a aceleração do desenvolvimento de eventos GM elites.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Soja (CNPSO)
Exemplares: | CNPSO - (28835-1) - UPC - SP - -- - 11525 -  - 11525 - DIS