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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
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Data corrente: |
28/01/2011 |
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Data da última atualização: |
22/02/2011 |
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Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. |
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Afiliação: |
CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS; BOLSISTA CNPGC; RENATO ANDREOTTI E SILVA, CNPGC; CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS. |
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Título: |
Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. |
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Ano de publicação: |
2010 |
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Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. |
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Páginas: |
1 p. |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
A proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. MenosA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Bm86-CG; Precipitação. |
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Thesagro: |
Proteína. |
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Categoria do assunto: |
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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| Registros recuperados : 1 | |
| 1. |  | CARGNINO, C.; SÁ, A. A. de; LIMA, C. M. de; SARAIVA, M. D.; NACHTIGALL, G. R.; ERNANI, P. R. Crescimento de frutos de macieira Maxigala submetida a tratamentos de irrigação e fertirrigação. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE FRUTICULTURA, 22., 2012, Bento Gonçalves. Anais... Bento Gonçalves: SBF, 2012. p. 6142-6145.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Uva e Vinho. |
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| Registros recuperados : 1 | |
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