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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
Data corrente: |
28/01/2011 |
Data da última atualização: |
22/02/2011 |
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
Autoria: |
SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. |
Afiliação: |
CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS; BOLSISTA CNPGC; RENATO ANDREOTTI E SILVA, CNPGC; CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS. |
Título: |
Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. |
Ano de publicação: |
2010 |
Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. |
Páginas: |
1 p. |
Idioma: |
Português |
Conteúdo: |
A proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. MenosA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Bm86-CG; Precipitação. |
Thesagro: |
Proteína. |
Categoria do assunto: |
-- |
Marc: |
LEADER 03024naa a2200205 a 4500 001 1874908 005 2011-02-22 008 2010 bl uuuu u00u1 u #d 100 1 $aSANTOS JUNIOR, A. G. 245 $aAvaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. 260 $c2010 300 $a1 p. 520 $aA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. 650 $aProteína 653 $aBm86-CG 653 $aPrecipitação 700 1 $aCUNHA, R. C. 700 1 $aANDREOTTI, R. 700 1 $aLEITE, F. P. L. 773 $tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM.
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Registro original: |
Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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Registros recuperados : 55 | |
4. | | SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. 1 p.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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6. | | ANDREOTTI, R.; SAIMO-KAHWA, M.; CUNHA, R. C.; BARROS, J. C.; LEITE, F. P. L. Characterization and Production of recombinant protein Ra92A from Rhipicephalus appendiculatus aiming tick vaccine antigen in Uganda. In: INTERNATIONAL CONGRESS OF PARASITOLOGY, 13., 2014, Mexico. Conference abstracts... Mexico City, Mexico: Academic Committee ICOPA Congress, 2014.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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8. | | SOUZA, C. C.; XAVIER, A.; LEITE, F. P.; SANTANA, R. C.; PAIVA, A. N. de. Densidade de minicepas em minijardim clonal na produção de mudas de eucalipto. Pesquisa Florestal Brasileira, Colombo, v. 34, n. 77, p. 49-56, jan./mar. 2014.Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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9. | | SILVA, M. A. da; SILVA, M. L. N.; CURI, N.; AVANZI, J. C.; LEITE, F. P. Sistemas de manejo em plantios florestais de eucalipto e perdas de solo e água na região do Vale do Rio Roce, MG. Ciência Florestal, Santa Maria, v. 21, n. 4, p. 765-776, out./dez. 2011.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 1 |
Biblioteca(s): Embrapa Pesca e Aquicultura. |
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11. | | PIRES, L. S.; SILVA, M. L. N.; CURI, N.; LEITE, F. P.; BRITO, L. de F. Erosão hídrica pós-plantio em florestas de eucalipto na região centro-leste de Minas Gerais. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, DF, v. 41, n. 4, p. 687-695, abr. 2006 Título em inglês: Water erosion in post-planting eucalyptus forests at center-east region of Minas Gerais State, Brazil.Biblioteca(s): Embrapa Unidades Centrais. |
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15. | | LEITE, F. P.; BARROS, N. F. de; SANS, L. M. A; FABRES, A. S. Regime hídrico do solo sob povoamento de eucalipto, floresta nativa e pastagem, na região de Guanhães-MG. Revista Árvore, Viçosa, v. 21, n. 4, p. 455-462, 1997.Tipo: Artigo em Periódico Indexado |
Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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16. | | CUNHA, R. C.; LEITE, F. P. L.; PINTO, L. da S.; SATO, T.; ANDREOTTI, R. Subclonagem do gene Bm86-CG em pPIC9 para expressão heteróloga em Pichia pastoris. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA 21.; ENCONTRO DE PARASITOLOGIA DO MERCOSUL, 2., 2009, Foz do Iguaçu. Novos horizontes em parasitologia: anais. Foz do Iguaçu: SBP, 2009. p. 1298. Revista Patologia Tropical, v. 38, jul.-set 2009. Suplemento 2.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Gado de Corte. |
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19. | | SILVA, A. R.; DIAS JUNIOR, M. de S.; LEITE, F. P.; CARVALHO, E. J. M.; VELOSO, C. A. C. Avaliação do efeito da camada de resíduos florestais na pressão de preconsolidação da um latossolo amarelo. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA DO SOLO, 33., 2011, Uberlândia. Solos nos biomas brasileiros: sustentabilidade e mudanças climáticas: anais. [Uberlândia]: SBCS: UFU, ICIAG, 2011.Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Amazônia Oriental. |
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20. | | SILVA, A. R.; DIAS JUNIOR, M. de S.; LEITE, F. P.; CARVALHO, E. J. M.; VELOSO, C. A. C. Avaliação do efeito da camada de resíduos florestais na pressão de preconsolidação de um latossolo vermelho. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA DO SOLO, 33., 2011, Uberlândia. Solos nos biomas brasileiros: sustentabilidade e mudanças climáticas: anais. [Uberlândia]: SBCS: UFU, ICIAG, 2011.Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Amazônia Oriental. |
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