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Biblioteca(s): 	Embrapa Soja.	
Data corrente: 	01/07/2008	
Data da última atualização: 	18/02/2016	
Autoria: 	FUGANTI, R.	
Título: 	Análise da região promotora do gene Gmhsp17.6-L em genótipos de soja resistentes e suscetíveis ao nematóide de galhas, Meloidogyne javanica.	
Ano de publicação: 	2007	
Fonte/Imprenta: 	2007.	
Páginas: 	124 f.	
Idioma: 	Português	
Notas: 	Tese (Doutorado) Universidade Estadual de Maringá, Maringá.	
Conteúdo: 	As espécies de nematóide do gênero Meloidogyne provocam sérias perdas na produção de soja mundial, levando, devido a este parasitismo, a prejuízos estimados em 11%. O marcador molecular microssatélite 176 Soy HSP mostrou alta correlação com o número de galhas em raízes de soja inoculadas com o patógeno. Uma análise de QTL  revelou a presença de pelo menos um gene localizado próximo ao marcador 176 Soy HSP, com valor de LOD score de 27.5. O fragmento amplificado, presente inicialmente apenas em amostras suscetíveis, mostrou 100% de similaridade com a região promotora do gene que codifica uma proteína de choque térmico de baixo peso molecular, presente na soja, Gmhsp 17.6-L (Número de acesso no GenBank: M11317). Primers foram desenhados para amplificar a região em ambos os genótipos resistente e suscetível. Todos os fragmentos também mostraram 100% de similaridade com a região promotora do gene Gmhsp 17.6-L. Dentro da região promotora, uma inserção de microssatélite correspondente a repetições AT(n) foi observada em todas as amostras. No entanto, o número de reptições AT era diferente em cada genótipo testado, com amostras resistentes apresentando maior número de repetições AT(n), quando comparadas com amostras suscetíveis e também com a sequência do gene Gmhsp 17.6-L disponível no GenBank. Na sequência de DNA correspondente á região codante da proteína, nenhuma diferença significativa na sequência nucleotídeos e aminoácidos foi encontrada entre todas as amostras e a sequência do GenBank. Para confirmar se a diferença no tamanho da inserção AT, dentro da região promotora do gene Gmhsp 17.6-L , refletia em diferentes níveis de expressão deste gene, um ensaio de proteção de ribonucleases foi realizado, mas nenhuma diferença foi detectada nos indivíduos parentais. Finalmente, uma quantificação relativa por PCR em tempo real foi executada. Os resultados indicaram que entre todas as amostras testadas, os indivíduos resistentes,JF7002, JF7027  e JF7056, inoculados com o nematóide, mostraram maior nível de expressão gênica quando comparados com todas as amostras restantes. Embriões de soja foram transformados em cassetes de expressão construídos com diferentes tamanhos de inserção AT(n) na região promotora. Depois de submetidos a estresses abióticos e biótico, a cultivar BRS 133 mostrou melhor resultado no ensaio histoquímico para detectar expressão do gene Gus. As plantas transformadas estão sendo mantidas em câmera para período de aclimatação, até que amostras possam ser coletadas para confirmação de eventos positivos, via PCR, com primers específicos.

Nematode species of the genus Meloidogyne causes severe yield losses in soybean production. It is estimated that 11 % of the annual losses in world production result from this parasitism. The microsatellite molecular marker 176 Soy HSP showed high correlation with the number of galls in soybean roots inoculated with the pathogen. The QTL analysis revealed the presence of at least one gene located next to the 176 Soy HSP marker, with a LOD score of 27.5. The amplified fragment, present at first only in susceptible samples showed 100% similarity with a promoter region of a small heat-shock protein (sHSP) gene found in soybean, Gmhsp17.6-L (GenBank accession number M11317). Primers were designed to amplify this region in both resistant and susceptible genotypes. All fragments also showed 100% similarity with promoter region of Gmhsp17.6-L gene. Inside the promoter region a microsatellite insertion, corresponding to a AT(n) repetitions was observed in all samples. However the number of AT repetitions was different in each genotype tested, with resistant samples presenting a higher number of AT(n) repetitions when compared to susceptible samples and also to the sequence from gene Gmhsp17.6-L available in GenBank. In heat shock protein coding region no significant mismatch was found in nucleotide and aminoacid sequence between sequences from all samples and sequence from GenBank. To confirm if this difference in the length of AT insertion in the Gmhsp17.6-L promoter region reflect in different levels of protein expression, a ribonuclease protection assay was performed but no difference was detected in the parental individuals. Finally, a real time polymerase chain reaction relative quantification was performed. Results indicated that among all samples, resistant individuals JF7002, JF7027 and JF7056 inoculated with the nematode showed higher gene expression level, when compared all remaining samples. Soybean embryos were transformed with expression cassettes built with different sizes of AT(n) repetitions inside promoter region. After submitted to diverse stresses, BRS133 cultivar showed better results in the histochimic assay done to detect Gus gene expression. Transformed plants are being kept in chamber for acclimatization until collection of samples to confirm positive events, through PCR with primers specific.	
Thesagro: 	Nematóide; Soja.	
Thesaurus Nal: 	Nematoda; Soybeans.	
Categoria do assunto: 	F Plantas e Produtos de Origem Vegetal	
Registro original: 	Embrapa Soja (CNPSO)	
Exemplares: 	CNPSO - (28222-1) - ADD - TS - -- - 15/07 -  - 15/07 - DIS