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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Mandioca e Fruticultura. |
Data corrente: |
25/09/2009 |
Data da última atualização: |
25/09/2009 |
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
Autoria: |
ANTONIOLI-LUIZON, R.; FREITAS-ASTUA, J.; LOCALI-FABRIS, E. C.; MACHADO, M. A.; KITAJIMA, E. W. |
Afiliação: |
Renata Antonioli-Luizon, APTA; Juliana Freitas-Ástua, CNPMF; Eliane Locali-Fabris, APTA; Marcos Antônio Machado, APTA; Elliot Watanabe Kitajima, ESALQ. |
Título: |
Sequenciamento parcial do vírus da pinta verde do maracujazeiro (Passion fruit green spot virus-PFGSV. |
Ano de publicação: |
2008 |
Fonte/Imprenta: |
In: ENCONTRO NACIONAL DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MICROBIOLOGIA, 3.; FÓRUM DOS COORDENADORES DOS PROGRAMAS DE MICROBIOLOGIA DA ÁREA DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS, 5.; 2008, Jaboticabal.[ Programação...]. Jaboticabal: Funep, 2008 |
Idioma: |
Português |
Conteúdo: |
O Brasil é o maior produtor mundial de maracujá, cultura essa afetada por um grande número de pragas e doenças. O vírus da pinta verde do maracujazeiro (Passion fruit green spot virus - PFGSV), transmitido pelo ácaro tenuipalpídeo Brevipalpus phoenicis, caracteriza-se pela formação de pequenas manchas verdes em frutos maduros e em folhas senescentes, e lesões necróticas em ramos que podem coalescer, produzindo anelamento e morte da planta. Exames ao microscópio eletrônico de transmissão (MET) revelam a presença de partículas baciliformes em cisternas do retículo endoplasmático e viroplasma denso no citoplasma. O diagnóstico da pinta verde é feito através dos sintomas típicos (o que é pouco confiável) ou de exames ao MET (o que é demorado e de alto custo) uma vez que que não estão disponíveis antissoros ou primers para teste sorológicos ou moleculares. Seu controle é essencialmente preventivo através do manejo químico do ácaro. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi sequenciar parcialmente o genoma do vírus a fim de obter subsídios para classificá-lo taxonomicamente, bem como desenvolver um método rápido e confiável para o diagnóstico da doença. O dsRNA de plantas de maracujá sintomáticas para pinta verde da região de Limeira-SP foi extraído, purificado e avaliado em de gel de agarose 1%. A síntese da 1º fita de cDNA foi realizada utilizando a enzima M-MLV-RT (Invitrogen) e random primers (Invitrogen). A 2º fita foi feita utilizando a enzima DNA Polimerase I (Promega). Após a síntese da 2º fita do cDNA, foi feita uma extração com fenol: clorofórmio para limpeza da amostra e o cDNA obtido foi ligado a adaptadores, amplificado por Nested PCR e purificado em gel LMP 1%. Os fragmentos purificados foram clonados em vetor pJET2.1 (Fermentas) e inseridos em celulas competentes de Escherichia coli da linhagem DH5a por choque térmico. Os clones transformantes foram coletados em microplacas contendo meio CG acrescido de ampicilina e após seu crescimento o DNA plasmadial foi extraído. O sequenciamento foi feito no Sequenciador automático ABI 3730 (Applied Biosystems). Nas sequências, na forma de eletroesferogramas, foram exclídas as regiões referentes ao vetores e adaptadores, analisadas pelos programas "Phred, Phrap, Consed" e agrupadas em contigs. As sequencias consensos foram submetidas à consulta de similaridade com outras sequências já depositadas no banco de dados GenBank através de BLASTn e BLASTx e só foram considerados alinhamentos com e-volue inferior a 10-³. As sequencias do PFGSV evidenciaram similaridade com regiões codificadoras da replicase (rep) e proteína de movimento (mp) do vírus da leprose dos citros (Citrus leprosis virus cytoplasmic type - CiLV-C), membro-tipo do recém-criado gênero Cilevirus e que apresenta morfologia, efeitos citopáticos e vetor semelhantes ao PFGSV. Foram desenhados primers para uma região da mp, que só amplificam amostras sintomáticas para pinta verde. Em conclusão, foram obtidas as primeiras sequências genômicas do PFGSV, o que deverá contribuir para a sua classificação taxonômica e gerar um método confiável para o diagnóstico da doença. MenosO Brasil é o maior produtor mundial de maracujá, cultura essa afetada por um grande número de pragas e doenças. O vírus da pinta verde do maracujazeiro (Passion fruit green spot virus - PFGSV), transmitido pelo ácaro tenuipalpídeo Brevipalpus phoenicis, caracteriza-se pela formação de pequenas manchas verdes em frutos maduros e em folhas senescentes, e lesões necróticas em ramos que podem coalescer, produzindo anelamento e morte da planta. Exames ao microscópio eletrônico de transmissão (MET) revelam a presença de partículas baciliformes em cisternas do retículo endoplasmático e viroplasma denso no citoplasma. O diagnóstico da pinta verde é feito através dos sintomas típicos (o que é pouco confiável) ou de exames ao MET (o que é demorado e de alto custo) uma vez que que não estão disponíveis antissoros ou primers para teste sorológicos ou moleculares. Seu controle é essencialmente preventivo através do manejo químico do ácaro. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi sequenciar parcialmente o genoma do vírus a fim de obter subsídios para classificá-lo taxonomicamente, bem como desenvolver um método rápido e confiável para o diagnóstico da doença. O dsRNA de plantas de maracujá sintomáticas para pinta verde da região de Limeira-SP foi extraído, purificado e avaliado em de gel de agarose 1%. A síntese da 1º fita de cDNA foi realizada utilizando a enzima M-MLV-RT (Invitrogen) e random primers (Invitrogen). A 2º fita foi feita utilizando a enzima DNA Polimerase I (Promega). ... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Biblioteca de cDNA; Sequenciamento de vírus. |
Categoria do assunto: |
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Marc: |
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Embrapa Mandioca e Fruticultura (CNPMF) |
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Publicado também em: Citrus Research & Technology, Cordeirópolis, v. 31, Suplemento, 2010Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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R 301Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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8. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | MASCARENHAS, G.; BARBOSA, C. de J.; KITAJIMA, E. W.; FREITAS-ÁSTUA, J. Alta eficiência de transmissão mecânica e por vetor do vírus da pinta verde (PFGSV) para maracujazeiro. Tropical Plant Pathology, Brasília, DF, v. 34, ago. 2009. Suplemento. Edição dos Resumos do XLII Congresso Brasileiro de Fitopatologia, Rio de Janeiro, ago. 2009. Suplemento. Resumo 911.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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9. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | RODRIGUES, A. S.; BARBOSA, C. de J.; SOARES FILHO, W. dos S.; FREITAS-ASTUA, J. de. Citrus rootstock hybrids tolerants to citrus tristeza virus and Bahia bark scaling disease. In: CONFERENCE INTERNATIONAL ORGANIZATION CITRUS VIROLOGISTS, 18., Campinas, SP, 2010. Proceedings... Campinas: IOCV, 2010. 1 CD-ROM. 106_PS2
Publicado também em: Citrus Research & Technology, Cordeirópolis, v. 31, Suplemento, 2010Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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10. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | KITAJIMA, E. W.; CHAGAS, C. M.; HARAKAWA, R.; FREITAS-ASTÚA, J.; RODRIGUES, J. C. V. Citrus leprosis in Florida may have been of the nuclear type. Virus Reviews & Research, Rio de Janeiro, v. 14, p. 90, 2009. Suplemento 1. Trabalho apresentado no XX Encontro Nacional de Virologia, Brasília, DF. Resumo 098.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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14. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | FARIA, A. S.; BASTIANEL, M.; MIRANDA, M.; NOVELLI, V. M.; FREITAS-ÁSTUA, J. Eficiência de transmissão do vírus da leprose dos citros nas diferentes fases ativas do ácaro vetor. Summa Phytopathologica, Botucatu, v. 34, , p. 58, fev. 2008. Suplemento. Edição dos Resumos do XXXI Congresso Paulista de Fitopatologia, Campinas, fev. 2008.
R 171Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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17. | ![Imagem marcado/desmarcado](/consulta/web/img/desmarcado.png) | FREITAS-ÁSTUA, J.; BASTIANEL, M.; NICOLINI, F.; SCHONS, J.; KITAJIMA, E. W.; MACHADO, M. A. Evidences to support that Citrus leprosis virus and its mite vector interact in a circulative - but not propagative - manner. In: INTERNATIONAL CITRUS CONGRESS, 11., 2008, Wuhan, China. Program and abstracts... Wuhan: The International Society of Citriculture, 2008. p. 237-238. P349Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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