Data/hora: 07/06/2024 12:21:44

Biblioteca(s): | Embrapa Gado de Corte.
Data corrente: | 14/02/2011
Data da última atualização: | 14/02/2011
Autoria: | FORNER, O.; ROSINHA, G. M. S.; ELISEI, C.; SOARES, C. O.; ARAUJO, F. R.; FRAGOSO, S. P.; SHIMADA, M. K.
Afiliação: | Doutoranda do PBCM da UFPR; GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC; Bolsista DTI-CNPq na Embrapa Gado de Corte.; CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC; FLABIO RIBEIRO ARAUJO, CNPGC; Pesquisador do Instituto Carlos Chagas / Fiocruz.; Bolsista Pós-Doc - Faperj.
Título: | Identificação do gene pccB A partir da varredura de uma biblioteca genômica de Corynebacterium pseudotuberculosis visando uma vacina contra linfadenite caseosa.
Ano de publicação: | 2009
Fonte/Imprenta: | In: JORNADA CIENTÍFICA DA EMBRAPA GADO DE CORTE,5., 2009, Campo Grande, MS. [Anais da ...]. Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2009.
Páginas: | 1 p.
Idioma: | Português
Conteúdo: | Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC), que acomete principalmente ovinos e caprinos. Esta doença é causadora de grandes problemas na ovinocaprinocultura. Diversas pesquisas tem sido realizadas na busca de uma vacina eficaz contra a LC. Estudos recentes utilizando um gene reporter em C. pseudotuberculosis, identificou a expressão do gene pccB (cadeia &#946; da propionil CoA carboxilase) em macrófagos, indicando um possível envolvimento na virulência deste patógeno e um bom antígeno a ser explorado no desenvolvimento de uma nova estratégia vacinal. Como a sequência deste gene ainda não está disponível em banco de dados, o objetivo deste trabalho foi realizar varredura em uma biblioteca genômica de C. pseudotuberculosis para identificação completa da sequência do gene pccB. Uma sonda foi gerada a partir de um fragmento parcial do gene pccB marcado com [&#945;32P]dCTP. A biblioteca genômica foi plaqueada em placas de lise para obter 2X103 pfu/placa e em seguida transferida para membranas de nylon previamente tratadas com soluções desnaturante, neutralizante e de pré-hibridização, a fim de, posteriormente, reagir com a sonda radioativa seguido da exposição das membranas a um filme de raio X. Dois clones positivos foram isolados e utilizados como template em reação de PCR, utilizando primers específicos da biblioteca genômica, gerando produtos de 3 Kb que foram sequenciados e analisados por BlastX, verificando-se 82% de identidade com o gene pccB2 de C. diphtheriae. Acreditando que haja sintenia entre as duas espécies mencionadas, foram desenhados primers com genes que flanqueiam o gene pccB2 de C. diphtheriae. Esses foram utilizados como iniciadores em reação de PCR, tendo como molde o DNA genômico de C. Pseudotuberculosis, gerando um fragmento de 2,1 Kb que foi clonado no vetor pGEM-T easy, sequenciado e analisado por BlastX. Resultados preliminares indicam que novos primers precisam ser desenhados para concluir a sequência deste gene.
Thesagro: | Corynebacterium Pseudotuberculosis; Linfadenite Caseosa; Sanidade Animal; Vacina.
Categoria do assunto: | H Saúde e Patologia
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/27133/1/IDENTIFICACAO-DO-GENE-pccB-A-PARTIR-DA-VARREDURA-DE-UMA-BIBLIOTECA.pdf
Registro original: | Embrapa Gado de Corte (CNPGC)
Exemplares: | CNPGC - (13715-1) - UPC - RA - DD - CD-144 - JOR -  - DIS