Data/hora: 20/06/2024 07:36:41

Biblioteca(s): | Embrapa Cerrados; Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.
Data corrente: | 02/05/2011
Data da última atualização: | 16/04/2014
Autoria: | FERREIRA, A. R.
Afiliação: | Alice Rodrigues Ferreira, UNB.
Título: | Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo X em embriões bovinos produzidos in vitro.
Ano de publicação: | 2009
Fonte/Imprenta: | 2009.
Páginas: | 51 f.
Idioma: | Português
Notas: | Dissertação (Mestrado em Ciências Animais) - Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientador: Maurício Machaim Franco, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.

Conteúdo:

O cultivo in vitro de embriões afeta mecanismos epigenéticos envolvidos no controle da expressão de genes relacionados ao desenvolvimento embrionário e inativação do cromossomo X. Fêmeas de mamíferos têm dois cromos somos X, e machos somente um. Isto levou à criação de um mecanismo evolutivo de compensação de dose, chamado inativação do cromossomo X. Durante a embriogênese, um dos dois cromossomos X é aleatoriamente inativado em cada célula da massa celular interna, e preferencialmente o paterno no trofoblasto. O objetivo deste estudo foi estabelecer o padrão de inativação do cromossomo X, avaliando a expressão alelo específica do gene MAO-A (monoamina oxidase tipo A) em embriões bovinos produzidos in vitro nos estádios de quatro células, oito a dezesseis células, mórula, blastocisto e blastocisto expandido. Um total de 100 embriões foi produzido in vitro (PIV), utilizando ovócitos aspirados de nove novilhas da raça Nelore homozigotas para o alelo A, inseminados com sêmen de um touro Holandês homozigoto para o alelo G sexado para fêmea, previamente genotipados para o gene MAO-A. Dois pools com 10 embriões cada, dos estágios de 4 células, 8-16 células, mó rul a, blastocisto e blastocisto expandido foram coletados. Esses pools de embriões foram congelados a -80°C para posterior extração de RNA total. Um pool de 15 ovócitos maturados e 5 palhetas de espermatozóides foi utilizado para extração de RNA. Para a fenotipagem do gene MAO-A nos pools de embriões foi utilizada a técnica de RT-PCR-RFLP. Para isso foram desenhados dois pares de primers flanqueando uma região específica do gene (GenBank accession number NM~181014.2) com um polimorfismo, permitindo assim a detecção da expressão alelo específica (Bos taurus taurus X Bos taurus indicus), ou seja, permitindo detectar qual alelo, se paternal ou maternal estava sendo expresso. Um produto de amplificação foi gerado por RT-PCR com os primers externos de cada pool de embriões de cada estágio de desenvolvimento e purificado. Posteriormente, os fragmentos foram sequenciados pela metodologia de dideoxy em um sequenciador ABI 3130xl (Applied Biosystem) usando os primers internos foward. O RNA total extraído das células espermáticas e ovócitos maturados foram utilizados para a detecção da presença do RNA mensageiro do gene MAO-A por RT-PCR. Os resultados mostraram que 
ambos os alelos estão expressos em embriões de 4-células, 8-16-células, blastocisto e blastocisto expandido, com a expressão do X paterno desaparecendo em mórula. Pode-se especular que ambos os cromossomos X estão ativos nos dois estádios iniciais, sendo inativados posteriormente e reativados em blastocisto.

Palavras-Chave: | Epigenética; PCR-RFLP; PIV.
Thesagro: | Bos Taurus; Embrião.

Categoria do assunto:

--
L Ciência Animal e Produtos de Origem Animal

Registro original: | Embrapa Cerrados (CPAC)

Exemplares:

CENARGEN - (33514-1) - UPA - TS - DD - 2011.012 - FER - 2011.012 - DIS
CPAC - (33960-1) - ADD - TS - PP - T031/09 -  - T031/09 - DIS