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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Milho e Sorgo. |
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Data corrente: |
25/11/2019 |
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Data da última atualização: |
29/11/2019 |
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Tipo da produção científica: |
Artigo em Periódico Indexado |
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Autoria: |
COSTA, J. F. da V.; LOPES, S. da S.; BARROS, B. de A.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de. |
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Afiliação: |
Jéssica Fabiane da Veiga Costa, Centro Universitário de Sete Lagoas; Simara da Silva Lopes, Universidade Federal de São João del-Rei; BEATRIZ DE ALMEIDA BARROS, CNPMS; ANDREA ALMEIDA CARNEIRO, CNPMS; SYLVIA MORAIS DE SOUSA TINOCO, CNPMS. |
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Título: |
Determinação do número de inserções de transgene em plantas transgênicas de tabaco por reação da cadeia da polimerase em tempo real. |
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Ano de publicação: |
2019 |
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Fonte/Imprenta: |
Cadernos Saberes, Sete Lagoas, n. 5, p. 208-229, 2019. |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia com PCR em tempo real (qPCR) para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando o gene Axi1 como controle endógeno. Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens e regeneradas com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para confirmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de tabaco transgênico T0 fora avaliados com o método 2-ΔCt para determinar o número relativo de cópias do gene Bar no genoma, utilizando Axi1 como gene de referência. Uma amostra com uma cópia (ZmPstol8.02 Ev.6) foi estabelecida pelo metódo 2-ΔCt e utilizada como referência de cópia única usando o método 2-ΔΔCt. Os resultados da determinação do número de cópias foram concordantes com as taxas de segregação em plantas T1 com o genótipo Bar de cada evento. Todos os três eventos cópia únicas tiveram segregação Mendeliana de 3:1 e esses resultados confirmam que Axi1 é um gene cópia única e pode ser usado como um controle endógeno para avaliar o número de cópias com o método 2-ΔΔCt em tabaco transgênico. MenosEm plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia com PCR em tempo real (qPCR) para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando o gene Axi1 como controle endógeno. Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens e regeneradas com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para confirmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de taba... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Axi1; Transgênico. |
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Thesagro: |
Fósforo; Nicotiana Tabacum. |
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Categoria do assunto: |
S Ciências Biológicas |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/205375/1/Determinacao-numero.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Milho e Sorgo (CNPMS) |
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| Registros recuperados : 28 | |
| 22. |  | ALBUQUERQUE, N. I. de; KAHWAGE, P. R.; COSTA, J. F.; MOREIRA, J. A.; GARCIA, A. R.; DIAS, H. T.; GUIMARÃES, D. A. de A. Avaliação da carcaça e dos componentes não-carcaça de caititus (Pecari tajacu) alimentados com torta de dendê. Archivos Latinoamericanos de Producción Animal, v. 20, n. 3-4, p. 55-60, 2012.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: B - 4 |
| Biblioteca(s): Embrapa Amazônia Oriental; Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 23. | | PACIULLO, D. S. C.; COSTA, J. F. N.; FERNANDES, E. N.; CASTRO, C. R. T. de; GOMIDE, C. A. de M.; MULLER, M. D.; VERNEQUE, R. da S. Características do pasto e desempenho de novilhas leiteiras em sistema silvipastoril e pastagem exclusiva de Brachiaria decumbens. In: CONGRESSO INTERNACIONAL DO LEITE, 6., 2007, Resende. Anais... Juiz de Fora: Embrapa Gado de Leite, 2007. 1 CD.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica | Circulação/Nível: -- - -- |
| Biblioteca(s): Embrapa Gado de Leite. |
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| 24. | | AMARAL, V. P. do; SOUZA FILHO, P. B. de; MORAES, J. R. da S. C. de; COSTA, J. F.; SANTIAGO, A. V. Balanço hídrico e classificação climatológica para o município de Belterra-PA. In: SIMPÓSIO DE ESTUDOS E PESQUISAS EM CIÊNCIAS AMBIENTAIS NA AMAZÔNIA, 3., 2014, Belém, PA. Anais. [Belém, PA]: Universidade do Estado do Pará, Centro de Ciências Naturais e Tecnologia, 2014. v. 1, p. 342-347.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Amazônia Oriental. |
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| 25. | | NOVO, S. M. F.; COSTA, J. F. dos R.; BACCILI, C. C.; SOBREIRA, N. M.; MAIA, M. A.; LEITE, S. B. P.; HURLEY, D. J.; GOMES, V. Specific immune response in neonate Holstein heifer calves fed fresh or frozen colostrum. Pesquisa Veterinária Brasileira, Brasília, DF, v. 37, n. 12, p. 1385-1394, dezembro. 2017. Título em português: Resposta imune específica em bezerras holandesas recém-nascidas alimentadas com colostro fresco ou congelado.| Biblioteca(s): Embrapa Unidades Centrais. |
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| 26. | | GOMES, G. M. F.; CÂNDIDO, M. J. D.; LOPES, M. N.; MARANHÃO, T. D.; ANDRADE, D. R. de; COSTA, J. F. M.; SILVEIRA, W. M.; NEIVA, J. N. M. Chemical composition of cactus pear cladodes under different fertilization and harvesting managements. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, DF, v. 53, n. 2, p. 221-228, Fev. 2018. Título em português: Composição química de cladódios de palma forrageira sob diferentes manejos de adubação e colheita.| Biblioteca(s): Embrapa Unidades Centrais. |
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| 27. | | LOPES, S. S.; PALHARES, P. L.; COSTA, J. F. V.; LANA, U. G. P.; ALVES, M. C.; MAGALHAES, J. V.; GUIMARAES, C. T.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de. Functional analysis of rice phosphorus-starvation tolerance 1 gene and its sorghum and maize homologs in transgenic tobacco. In: SIMPÓSIO BRASILEIRO DE GENÉTICA MOLECULAR DE PLANTAS, 6., 2017, Ouro Preto. Resumos... Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 2017.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 28. | | LOPES, S. S.; COSTA, J. F. V.; PALHARES, P. L.; LANA, U. G. de P.; ALVES, M. C.; MAGALHAES, J. V. de; GUIMARÃES, C. T.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de. Overexpression of maize and sorghum Phosphorus-Starvation Tolerance 1 genes enhance vegetative growth and root surface area in transgenic tobacco In: SIMPÓSIO BRASILEIRO DE GENÉTICA MOLECULAR DE PLANTAS, 7., 2019, Campos do Jordão. Resumos. [S.l.]: Sociedade Brasileira de Genética, 2019.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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