Data/hora: 21/06/2024 11:16:00

Biblioteca(s): | Embrapa Soja.
Data corrente: | 22/12/2005
Data da última atualização: | 22/12/2005
Autoria: | BINDE, D. R.; CHUEIRE, L. M. O.; LUCASI. H.; NICOLÁS, M. F.; VASCONCELOS, A. T. R.; GONZAGA, L. P.; SOUZA, R. C.; MARTINEZ-ROMERO, E.; FERNANDO GOMES BARCELLOS, F. G.; SILVA, M. F.; GARCIA, J. E.; HUNGRIA, H.
Título: | Seqüenciamento do plasmídeo simbiótico da estirpe CFN 299 de Rhizobium tropici.
Ano de publicação: | 2005
Fonte/Imprenta: | In: SEMANA DE BIOTECNOLOGIA, 1., 2005, Londrina. [Resumos]. Londrina: UEL, 2005.
Descrição Física: | 1 CD-ROM.
Idioma: | Português
Notas: | Resumo - Pdf. 41.

Conteúdo:

O objetivo desse trabalho foi seqüenciar parcialmente o plasmídeo simbiótico da estirpe
CFN 299 de Rhizobium tropici, que se associa simbioticamente ao feijoeiro ( Phaseolus
vulgaris), estabelecendo o processo de fixação biológica do nitrogênio. Inicialmente foram
construídas bibliotecas "shotgun" pela fragmentação do DNA ao acaso, por nebulização, obtendo fragmentos de 500 pares de bases (pb) a2 kb. Os fragmentos foram reparados e fosforilados por Klenow da DNA polimerase de Escherichia coli e separados em gel de agarose "low melting". A seguir, foram recuperados e ligados ao vetor pUC18, digerido com a enzima de restrição SmaI-BAP e defosforilados com a enzima T4 DNA ligase. Após a ligação, o material foi utilizado para transformação por eletroporação de células de E. coli estirpe DH10B. As células foram plaqueadas em meio contendo ampicilina, IPTG e X-gal e foram crescidas durante a noite, a 37° C. Colônias brancas individuais ( clones recombinantes) foram inoculadas em meio de cultura com ampicilina e crescidas, procedendo-se ao estoque a -80% e a novo crescimento, conforme descrito, para extração do DNA, realizado pelo método de rompimento alcalino. Após a precipitação, filtragem e verificação da concentração, o seqüenciamento foi realizado pelo método dos terminadores fluorescentes, em um seqüenciador automático MegaBACE ( Amersham Pharmacia Biotech). As leituras obtidas foram submetidas a análises de bioinformática. Até o presente momento foram construídas duas bibliotecas e foram realizadas 1.325 leituras, com o depósito de 1.220.032 pb.

Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Soja (CNPSO)
Exemplares: | CNPSO - (25866-1) - UPC - PL - -- - CD 0142 -  -  - DIS