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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Arroz e Feijão; Embrapa Meio-Norte; Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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Data corrente: |
05/09/1997 |
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Data da última atualização: |
19/12/2006 |
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Autoria: |
ARAGÃO, F. J. L. |
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Título: |
Transformação genética do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) visando a introdução e expressão de genes de interesse agronômico. |
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Ano de publicação: |
1996 |
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Fonte/Imprenta: |
1996. |
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Páginas: |
198 p. |
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Idioma: |
Português |
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Notas: |
Tese (Doutorado em Biologia Molecular) - Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Brasília, DF. |
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Conteúdo: |
A engenharia genética possibilita a transferência de características para as diferentes espécies. Nos últimos anos várias características novas têm sido introduzi das em plantas comercialmente importantes, produzindo novas cultivares que não poderiam ser obtidas através dos cruzamentos convencionais.
A presente tese é composta de uma série de artigos, cujos resumos são apresentados a seguir:
Com o objetivo de desenvolver um protocolo eficiente de transformação de feijão através do sistema de Agrobacterium, a susceptibilidade de cultivares de Phaseolus vulgaris e P. accutifolios a seis genótipos de A. tumefacies e A. rhizogenes foi avaliada. Os resultados mostraram que a virulência das cepas de Agrobacterium foi dependente do genótipo. Em geral, os sintomas foram mais marcantes em feijão (P. vulgaris) que em tepari (P. accutifolios). Análises de PCR mostraram que os tumores derivados da infecção com agrobacterium eram transgênicos. Meristemas apicais de feijão cv Jalo foram bombardeados com micropartículas e inoculados com A. tumefaciens Ach5. Após um mês, os explantes mostraram uma alta fteqüência de formação de tumor (50-70%). Resultados similares foram obtidos coma cepa desarmada de A. tumefaciens LBA4404/p35SGUSINT. Um mês após o bombardeamento, a região apical mostrou grandes setores com atividade da enzima GUS, sugerindo estarem transformados.
Foram avaliados os parâmetros que influenciam a expressão transiente do gene gus em eixos embrionários, cotilédones, meristemas apicais e folhas de feijão, após a introdução dos genes através da aceleração de partículas. Um método para recobrir partículas de ouro com o DNA, utilizando cálcio e espermidina, foi desenvolvido, resultando em uma grande expressão do gene gus, superior ao método que utiliza fosfato de cálcio. A concentração do DNA, distância entre a câmara de descarga e a tela de retenção e o vácuo também influenciaram na introdução dos genes. Através de microscopia eletrônica, foi possível localizar as partículas no interior das células. Através de imunolocalização, pôde-se confirmar a expressão do gene introduzido, verificando-se que o produto gênico estava distribuído no citoplasma.
Através do processo biobalístico, foram obtidas plantas transgênicas de feijão. A co-transformação foi avaliada, utilizando-se a fusão gus-nptIl (no plasmídio pBI426), o genes da albumina 2S (no plasmídio pEA23) e os genes do BGMV, ACl, AC2, AC3 e BCl (no plasmídio pAC123BCI-BZ). Os resultados mostraram que a fteqüência de co-transformação variou de 40-50% para os genes em plasmídios separados e foi de 100% para os genes presentes em um mesmo plasmídio. A herança do genes introduzidos mostrou um padrão Mendeliano para a maioria das linhagens. Análises de PCR e Southern blot, confirmaram a integração do genes introduzidos ao genoma vegetal.
Alguns aspectos que influenciam a obtenção de plantas transgênicas de feijão foram estudados. A morfologia do ápice meristemático de 17 cultivares de grupo Carioca e Jalo foi analisada. Alguns cultivares mostraram a região meristemática total ou parcialmente coberta pelos primórdios foliares. As cultivares que apresentaram a região meristemática 100% exposta foram utilizadas nos estudos de indução de multibrotação em presença de BAP (nas concentrações de 4,4 J.lM, 22,2 JlM e 44.4 J.lM). A cultivar PF9029984 apresentou uma multibrotação prolífica. As etapas iniciais da multibrotação na região meristemática apical foram estudadas através da microscopia eletr{!nica de varredura. Plantas transgênicas do cultivar Carioca foram obtidas através do processo biobalístico. A segregação do gene introduzido seguiu as leis de Mendel em todas as linhagens. Análises de Southern blot confirmaram a integração dos genes introduzidos ao genoma das plantas.
Sementes de feijão (cvs. Carioca e Jalo ) e soja (cvs. Davis, Doko, Eureka, Cariri, BR-15 e Cristalina) foram bombardeadas com os dois componentes (A e B) clonados, do vírus do mosaico dourado do feijoeiro (BGMV) isolados do Brasil. Os cultivares de feijão: Carioca e Jalo e de soja, Davis e Cariri, apresentaram sintomas típicos de mosaico dourado. A presença do vírus na planta foi confirmada através de "squash blot hybridization".
Os genes ACI-2-3 e BC do bean golden mosaic virus foram clonados em antisense, sob o controle do promotor 35S CaMV. Esta construção foi utilizada para transformar plantas de feijão através do processo biobalístico. As plantas transgênicas, na geração R3 e R4 foram desafiadas contra o vírus, inoculado através de mosca branca. Os resultados mostraram uma atenuação e retardamento dos sintomas nas plantas transgênicas contendo as seqüências virais em antisense.
O genes da albumina 2S de castanha-do-Pará foi introduzido em plantas de feijão, com o objetivo de avaliar o potencial da expressão de uma proteína de reserva em leguminosa, coma a finalidade de alterar seu valor nutricional. Neste trabalhos, mostramos que o gene da albumina 2S, uma proteína rica em metionina, foi corretamente expresso, sob o controle do promotor 35S CaMV e transmitido para a progênie. Em duas linhagens verificou-se um aumento no teor de metionina de 11 a 15% sobre o encontrado nas plantas não transformadas. MenosA engenharia genética possibilita a transferência de características para as diferentes espécies. Nos últimos anos várias características novas têm sido introduzi das em plantas comercialmente importantes, produzindo novas cultivares que não poderiam ser obtidas através dos cruzamentos convencionais.
A presente tese é composta de uma série de artigos, cujos resumos são apresentados a seguir:
Com o objetivo de desenvolver um protocolo eficiente de transformação de feijão através do sistema de Agrobacterium, a susceptibilidade de cultivares de Phaseolus vulgaris e P. accutifolios a seis genótipos de A. tumefacies e A. rhizogenes foi avaliada. Os resultados mostraram que a virulência das cepas de Agrobacterium foi dependente do genótipo. Em geral, os sintomas foram mais marcantes em feijão (P. vulgaris) que em tepari (P. accutifolios). Análises de PCR mostraram que os tumores derivados da infecção com agrobacterium eram transgênicos. Meristemas apicais de feijão cv Jalo foram bombardeados com micropartículas e inoculados com A. tumefaciens Ach5. Após um mês, os explantes mostraram uma alta fteqüência de formação de tumor (50-70%). Resultados similares foram obtidos coma cepa desarmada de A. tumefaciens LBA4404/p35SGUSINT. Um mês após o bombardeamento, a região apical mostrou grandes setores com atividade da enzima GUS, sugerindo estarem transformados.
Foram avaliados os parâmetros que influenciam a expressão transiente do gene gus em eixos embrionários, cotilédones, meristemas ... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Bean; Biobalística; Desenvolvimento de protocolo; Feijao: Genatica; Phaseolus vulgaris L; Plantas transgênicas; Transformação genética. |
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Thesagro: |
Engenharia Genética; Feijão; Genética; Phaseolus Vulgaris. |
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Thesaurus Nal: |
Agrobacterium; genetic transformation. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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Marc: |
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300 $a198 p.
500 $aTese (Doutorado em Biologia Molecular) - Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Brasília, DF.
520 $aA engenharia genética possibilita a transferência de características para as diferentes espécies. Nos últimos anos várias características novas têm sido introduzi das em plantas comercialmente importantes, produzindo novas cultivares que não poderiam ser obtidas através dos cruzamentos convencionais. A presente tese é composta de uma série de artigos, cujos resumos são apresentados a seguir: Com o objetivo de desenvolver um protocolo eficiente de transformação de feijão através do sistema de Agrobacterium, a susceptibilidade de cultivares de Phaseolus vulgaris e P. accutifolios a seis genótipos de A. tumefacies e A. rhizogenes foi avaliada. Os resultados mostraram que a virulência das cepas de Agrobacterium foi dependente do genótipo. Em geral, os sintomas foram mais marcantes em feijão (P. vulgaris) que em tepari (P. accutifolios). Análises de PCR mostraram que os tumores derivados da infecção com agrobacterium eram transgênicos. Meristemas apicais de feijão cv Jalo foram bombardeados com micropartículas e inoculados com A. tumefaciens Ach5. Após um mês, os explantes mostraram uma alta fteqüência de formação de tumor (50-70%). Resultados similares foram obtidos coma cepa desarmada de A. tumefaciens LBA4404/p35SGUSINT. Um mês após o bombardeamento, a região apical mostrou grandes setores com atividade da enzima GUS, sugerindo estarem transformados. Foram avaliados os parâmetros que influenciam a expressão transiente do gene gus em eixos embrionários, cotilédones, meristemas apicais e folhas de feijão, após a introdução dos genes através da aceleração de partículas. Um método para recobrir partículas de ouro com o DNA, utilizando cálcio e espermidina, foi desenvolvido, resultando em uma grande expressão do gene gus, superior ao método que utiliza fosfato de cálcio. A concentração do DNA, distância entre a câmara de descarga e a tela de retenção e o vácuo também influenciaram na introdução dos genes. Através de microscopia eletrônica, foi possível localizar as partículas no interior das células. Através de imunolocalização, pôde-se confirmar a expressão do gene introduzido, verificando-se que o produto gênico estava distribuído no citoplasma. Através do processo biobalístico, foram obtidas plantas transgênicas de feijão. A co-transformação foi avaliada, utilizando-se a fusão gus-nptIl (no plasmídio pBI426), o genes da albumina 2S (no plasmídio pEA23) e os genes do BGMV, ACl, AC2, AC3 e BCl (no plasmídio pAC123BCI-BZ). Os resultados mostraram que a fteqüência de co-transformação variou de 40-50% para os genes em plasmídios separados e foi de 100% para os genes presentes em um mesmo plasmídio. A herança do genes introduzidos mostrou um padrão Mendeliano para a maioria das linhagens. Análises de PCR e Southern blot, confirmaram a integração do genes introduzidos ao genoma vegetal. Alguns aspectos que influenciam a obtenção de plantas transgênicas de feijão foram estudados. A morfologia do ápice meristemático de 17 cultivares de grupo Carioca e Jalo foi analisada. Alguns cultivares mostraram a região meristemática total ou parcialmente coberta pelos primórdios foliares. As cultivares que apresentaram a região meristemática 100% exposta foram utilizadas nos estudos de indução de multibrotação em presença de BAP (nas concentrações de 4,4 J.lM, 22,2 JlM e 44.4 J.lM). A cultivar PF9029984 apresentou uma multibrotação prolífica. As etapas iniciais da multibrotação na região meristemática apical foram estudadas através da microscopia eletr{!nica de varredura. Plantas transgênicas do cultivar Carioca foram obtidas através do processo biobalístico. A segregação do gene introduzido seguiu as leis de Mendel em todas as linhagens. Análises de Southern blot confirmaram a integração dos genes introduzidos ao genoma das plantas. Sementes de feijão (cvs. Carioca e Jalo ) e soja (cvs. Davis, Doko, Eureka, Cariri, BR-15 e Cristalina) foram bombardeadas com os dois componentes (A e B) clonados, do vírus do mosaico dourado do feijoeiro (BGMV) isolados do Brasil. Os cultivares de feijão: Carioca e Jalo e de soja, Davis e Cariri, apresentaram sintomas típicos de mosaico dourado. A presença do vírus na planta foi confirmada através de "squash blot hybridization". Os genes ACI-2-3 e BC do bean golden mosaic virus foram clonados em antisense, sob o controle do promotor 35S CaMV. Esta construção foi utilizada para transformar plantas de feijão através do processo biobalístico. As plantas transgênicas, na geração R3 e R4 foram desafiadas contra o vírus, inoculado através de mosca branca. Os resultados mostraram uma atenuação e retardamento dos sintomas nas plantas transgênicas contendo as seqüências virais em antisense. O genes da albumina 2S de castanha-do-Pará foi introduzido em plantas de feijão, com o objetivo de avaliar o potencial da expressão de uma proteína de reserva em leguminosa, coma a finalidade de alterar seu valor nutricional. Neste trabalhos, mostramos que o gene da albumina 2S, uma proteína rica em metionina, foi corretamente expresso, sob o controle do promotor 35S CaMV e transmitido para a progênie. Em duas linhagens verificou-se um aumento no teor de metionina de 11 a 15% sobre o encontrado nas plantas não transformadas.
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650 $aGenética
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653 $aFeijao: Genatica
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653 $aTransformação genética
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Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN) |
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