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| Registros recuperados : 19 | |
| 3. |  | ANDRADE, W. J. de; ZANCHETTA, D.; ROBIM, M. de J. Proposta de um sistema de trilhas para o Parque Estadual de Campos de Jordão. Revista do Instituto Florestal, São Paulo, v. 4, pt. 3, p. 964-970, mar. 1992. Edição dos Anais do Congresso Florestal de Essências Nativas, 2., 1992, São Paulo. Edição especial.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 4. | | MARCONDES, M. A. P.; ANDRADE, W. J. de. Terminologia em manejo de áreas silvestres. Silvicultura, São Paulo, v. 12, n. 42, t. 3, p. 778-782, 1992. Edição dos Anais do Congresso Florestal Brasileiro, 6., 1990, Campos do Jordão.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 5. | | ANDRADE, W. J. de; ROCHA, L. M. da. Planejamento, implantação e manutenção de trilhas. Silvicultura, São Paulo, v. 12, n. 42, t. 3, p. 786-794, 1992. Edição dos Anais do Congresso Florestal Brasileiro, 6., 1990, Campos do Jordão.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 7. | | OGAWA, H. Y.; MOTA, I. S. da; FAVRIN, L. J. de; VALENTINO, R. A. L.; ANDRADE, W. J. de. Inventário florestal do Estado de São Paulo, cobertura vegetal natural de duas sub-regiões do Vale do Paraíba. Silvicultura em São Paulo, São Paulo, v. 16-A, pt. 1, p. 441-446, 1982. Edição dos Anais do Congresso Nacional sobre Essências Nativas, 1982, Campos do Jordão.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 8. | | ANDRADE, W. J. de; BERTONI, J. E. de A.; ZANCHETTA, D.; LOBO, M. T.; SOUZA, S. A. de. Programa de uso publico do Parque Estadual de Vassununga. In: CONGRESSO FLORESTAL PANAMERICANO, 1.; CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO, 7., 1993, Curitiba. Floresta para o Desenvolvimento: Política, Ambiente, Tecnologia e Mercado: anais. São Paulo: SBS; [S.l.]: SBEF, 1993. v. 2, p. 722. Resumo.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 9. | | ANDRADE, W. J. de; GIANOTTI, E.; FERREIRA-DA-SILVA, C. E. da; SARAIVA, I. R.; FERREIRA, A. S.; ZANCHETTA, D.; FARINHA, E. M. K. Guias das unidades de conservação e produção florestal no Estado de São Paulo. Revista do Instituto Florestal, São Paulo, v. 4, pt. 3, p. 880-885, mar. 1992. Edição dos Anais do Congresso Florestal de Essências Nativas, 2., 1992, São Paulo. Edição especial.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 10. | | ANDRADE, W. J. de; ESTON, M. R. de E.; SILVA, D. A. da; VILELA, F. E. S. P.; DUTRA, H.; VILAR, D. D.; MOTA, I. S. da. Programa de capacitacao em manejo de areas silvestres para estudantes universitarios no instituto florestal de Sao Paulo. In: CONGRESSO FLORESTAL PANAMERICANO, 1.; CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO, 7., 1993, Curitiba. Floresta para o Desenvolvimento: Política, Ambiente, Tecnologia e Mercado: anais. São Paulo: SBS; [S.l.]: SBEF, 1993. v. 2, p. 720. Resumo.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 11. | | LEPSCH, I. F.; SARAIVA, I. R.; DONZELI, P. L.; MARINHO, M. de A.; SAKAI, E.; GUILLAUMON, J. R.; PFEIFER, R. M.; MATTOS, I. F. de A.; ANDRADE, W. J. de; SILVA, C. E. F. da. Macrozoneamentos das terras da regiao do Rio Ribeira de Iguape SP. Campinas: Instituto Agronomico, 1990. 181p. (Instituto Agronomico. Boletim Cientifico, 19). Contem 2 mapas.| Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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| 12. | | LEPSCH, I. F.; SARAIVA, I. R.; DONZELI, P. L.; MARINHO, M. de A.; SAKAI, E.; GUILLAUMON, J. R.; PFEIFER, R. M.; MATTOS, I. F. de A.; ANDRADE, W. J. de. Macrozoneamento das terras da região do Rio Ribeira de Iguape, SP. Campinas: IAC, 1990. 181 p. il. (IAC. Boletim Cientifico, 19). Contem mapa.| Biblioteca(s): Embrapa Amazônia Oriental; Embrapa Trigo. |
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| 13. | | LEPSCH, I. F.; SARAIVA, I. R.; DONZELI, P. L.; MARINHO, M. de A.; SAKAI, E.; GUILLAUMON, J. R.; PFEIFER, R. M.; MATTOS, I. F. de A.; ANDRADE, W. J. de; SILVA, C. E. F. da. Macrozoneamento das terras da região do Rio Ribeira de Iguape, SP. Campinas: Instituto Agronômico, 1990. 181 p. Acompanha 2 mapas, p&b. Escala 1:500.000. (IAC. Boletim científico, 19).| Biblioteca(s): Embrapa Solos. |
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| 15. | | ANDRADE, W. J. de; MARCONDES, M. A. P.; MATTOS, I. F. de A.; ROSSI, M.; SILVA, D. A. da; CARVALHO, J. L. de; VILAR, D. D.; ROBIM, M. de J.; ZANCHETTA, D. Proposta de criação e manejo do monumento natural estadual da "Pedra do Baú". Revista do Instituto Florestal, São Paulo, v. 4, pt. 3, p. 947-955, mar. 1992. Edição dos Anais do Congresso Florestal de Essências Nativas, 2., 1992, São Paulo. Edição especial.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 16. | | ANDRADE, W. J. de; MARCONDES, M. A. P.; MATTOS, I. F. de A.; ROSSI, M.; SILVA, D. A. da; CARVALHO, J. L. de; NALON, M. A.; VILAR, D. D. Proposta de criacao e manejo do Parque Estadual de Serra Fina. In: CONGRESSO FLORESTAL PANAMERICANO, 1.; CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO, 7., 1993, Curitiba. Floresta para o Desenvolvimento: Política, Ambiente, Tecnologia e Mercado: anais. São Paulo: SBS; [S.l.]: SBEF, 1993. v. 2, p. 723. Resumo.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 17. | | BRANCO, I. H. D.; DOMINGUES, E. N.; SERIO, F. C.; DELCALI, I. H.; MATTOS, I. F. de A. BERTONI, J. E de A.; ROSSI, M.; ESTON, M. R. de PFEIFER, R. M.; ANDRADE, W. J. de. Plano conceitual de manejo - Parque Estadual das Furnas do Bom Jesus. Revista do Instituto Florestal, v.3, n.2, p.137-155, 1989| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 18. | | DELGADO, J. M.; BARBOSA, A. F.; SILVA, C. E. F. da; ZANCHETTA, D.; SILVA, D. A. da; GIANNOTTI, E.; PINHEIRO, G. de S.; LUTGENS, H. D.; FACHIN, H. C.; MOTA, I. S. da; LOBO. M. T.; NEGREIROS, O. C. de; ANDRADE, W. J. de. Plano de manejo integrado das Unidades de Itirapina - SP. IF Série Registros, São Paulo, n. 27, p. 1-153, nov. 2004.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 19. | | TABANEZ, M. F.; DURIGAN, G.; KEUROGHLIAN, A.; BARBOSA, A. F.; FREITAS, C. A. de; SILVA, C. E. F. da; SILVA, D. A. da; EATON, D. P.; BRISOLLA, G.; FARIA, H. H. de; MATTOS, I. F. de A.; LOBO, M. T.; BARBOSA, M. R.; ROSSI, M.; SOUZA, M. das G. de; MACHADO, R. B.; PFEIFER, R. M.; RAMOS, V. S.; ANDRADE, W. J. de; CONTIERI, W. A. Plano de manejo da Estação Ecológica dos Caetetus. IF Série Registros, São Paulo, n. 29, p. 3-104, fev. 2005.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| Registros recuperados : 19 | |
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Registro Completo
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Biblioteca(s): |
Embrapa Milho e Sorgo. |
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Data corrente: |
09/10/2018 |
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Data da última atualização: |
12/02/2019 |
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Tipo da produção científica: |
Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento |
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Autoria: |
COSTA, J. F. da V.; LOPES, S. da S.; BARROS, B. de A.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de. |
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Afiliação: |
Jéssica Fabiane da Veiga Costa, Centro Universitário de Sete Lagoas - UNIFEMM; Simara da Silva Lopes, Universidade Federal de São João de Rei; BEATRIZ DE ALMEIDA BARROS, CNPMS; ANDREA ALMEIDA CARNEIRO, CNPMS; SYLVIA MORAIS DE SOUSA TINOCO, CNPMS. |
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Título: |
Determinação do número de cópias de transgenes em eventos de tabaco por PCR em tempo real. |
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Ano de publicação: |
2018 |
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Fonte/Imprenta: |
Sete Lagoas: Embrapa Milho e Sorgo, 2018. |
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Páginas: |
23 p. |
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Série: |
(Embrapa Milho e Sorgo. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 168). |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
Por causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para confirmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado no vetor pGEM-T Easy e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de tabaco transgênico T0 fora avaliados com o método 2-?Ct para determinar o número relativo de cópias do gene Bar no genoma, utilizando Axi1 como gene de referência. Uma amostra com uma cópia (ZmPstol8.02 Ev.6) foi estabelecida pelo metódo 2-?Ct e utilizada como referência de cópia única usando o método 2-??Ct. Os resultados da determinação do número de cópias foram concordantes com as taxas de segregação em plantas T1 com o genótipo Bar de cada evento. Todos os três eventos cópia únicas tiveram segregação Mendeliana de 3:1 e esses resultados confirmam que Axi1 é um gene cópia única e pode ser usado como um controle endógeno para avaliar o número de cópias com o método 2-??Ct em tabaco transgênico. MenosPor causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765)... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Transgênico. |
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Thesagro: |
Engenharia Genética; Planta Transgênica. |
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Categoria do assunto: |
G Melhoramento Genético |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/184128/1/bol-168.pdf
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Marc: |
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005 2019-02-12
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245 $aDeterminação do número de cópias de transgenes em eventos de tabaco por PCR em tempo real.$h[electronic resource]
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300 $a23 p.
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520 $aPor causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para confirmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado no vetor pGEM-T Easy e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de tabaco transgênico T0 fora avaliados com o método 2-?Ct para determinar o número relativo de cópias do gene Bar no genoma, utilizando Axi1 como gene de referência. Uma amostra com uma cópia (ZmPstol8.02 Ev.6) foi estabelecida pelo metódo 2-?Ct e utilizada como referência de cópia única usando o método 2-??Ct. Os resultados da determinação do número de cópias foram concordantes com as taxas de segregação em plantas T1 com o genótipo Bar de cada evento. Todos os três eventos cópia únicas tiveram segregação Mendeliana de 3:1 e esses resultados confirmam que Axi1 é um gene cópia única e pode ser usado como um controle endógeno para avaliar o número de cópias com o método 2-??Ct em tabaco transgênico.
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700 1 $aSOUSA, S. M. de
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Registro original: |
Embrapa Milho e Sorgo (CNPMS) |
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