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Biblioteca(s): | Embrapa Agropecuária Oeste; Embrapa Cerrados.
Data corrente: | 22/06/2001
Data da última atualização: | 22/06/2001
Autoria: | ANDRADE, S. R. M. de.
Título: | Otimizacao da tecnica SAAT ("Sonication-assisted Agrobacterium-Mediated Transformation") para transformacao de Phaseolus vulgaris.
Ano de publicação: | 2001
Fonte/Imprenta: | Piracicaba: ESALQ, 2001.
Páginas: | 102p.
Idioma: | Português
Notas: | Tese Doutorado.
Conteúdo: | Phaseolus vulgaris L. era considerado recalcitrante a transformacao por Agrobacterium. Entretanto, alteracoes no meio de co-cultivo, utilizacao de linhagens hipervirulentas de Agrobacterium e de vetores binarios contendo genes vir demonstraram que o feijoeiro e susceptivel a Agrobacterium. No entanto, ainda nao foram obtidas plantas transgenicas de feijoeiro por meio deste metodo. Em 1997, Trick & Finer descreveram a metodologia SAAT ("Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation"). Esta tecnica consiste em produzir microferimentos no emplante atraves da sonicacao por curtos periodos de tempo na presenca do Agrobacterium. Por meio deste metodo foram obtidas plantas transgenicas de soja e trigo. O objetivo do presente trabalho foi ajustar a metodologia SAAT para a transformacao de P.vulgaris. A variedade de feijoeiro utilizada foi a Olathe Pinto, a linhagem de Agrobacterium tumefaciens foi LBA4404:pTOK. Foram estudados o efeito do pre-tratamento, tempo de co-cultivo, duracao do SAAT e presenca de acetocerigona. Os resultados demonstram que a expressao transitoria e estavel da (beta, simbolo) glucoronidase foi maior quando os eixos embrionarios foram pre-tratados por 10 a 14 dias em meio de multibrotacao. O antibiotico geneticina (G418) apresenttou maior capacidade de selecao de brotos do que canamicina, nas concentracoes estudadas. SAAT de 60 segundos de explantes apresenta melhor expressao transitoria e estavel da (beta-simbolo) glucoronidase. O tempo de co-cultivo liquido de 2 horas seguido de 48 horas em meio solido, na ausencia de acetocerigona, apresentou a maior expressao transitoria. A presenca de acetocerigona (20 mg/I) aumentou a expressao transitoria. Pre-incubacao por 24horas nao aumentou a eficiencia do tratamento SAAT. As analises de microscopia optica e de varredura demonstraram a presenca de rupturas na epiderme, quebras de parede celular e invasao do Agrobacterium nos tecidos subepidermicos. Os resultados demonstraram que o metodo SAAT e uma tecnica viavel para a transformacao de P. vulgaris via Agrobacterium.
Palavras-Chave: | Bean; Melhoramento genetico; SAAT; Transformacao genetica.
Thesagro: | Bactéria; Engenharia Genética; Feijão; Patógeno; Phaseolus Vulgaris.
Thesaurus Nal: | Agrobacterium; genetic engineering; genetic transformation; kidney beans; pathogens; plant breeding.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Cerrados (CPAC)

Exemplares:

CPAO - (16936-1) - ADP - TS - PP - T 10/01 -  - 01.00056 - DIS
CPAC - (16660-1) - ADD - TS - -- - T001/01 - AND - T001/01 - DIS