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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Agrobiologia. |
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Data corrente: |
15/08/2001 |
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Data da última atualização: |
15/08/2001 |
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Autoria: |
JUNGHANS, T. G. |
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Título: |
Fixação de nitrogênio, atividade enzimática e isolamento de um cDNA de lipoxigenases do sistema radicular de soja. |
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Ano de publicação: |
2000 |
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Fonte/Imprenta: |
2000. 97f. Tese (Doutorado em Fisiologia vegetal). Universidade Federal de Vicosa, Vicosa, Minas Gerais. |
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Idioma: |
Português |
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Notas: |
Orientado por: Maurílio Alves Moreira. |
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Conteúdo: |
Linhagens de soja triplo nulas (desprovidas das lipoxigenases da semente) foram comparadas com as variedades comerciais elite que lhe deram origem quanto a capacidade de nodulação e fixação de nitrogênio. Os resultados indicaram que as isoenzimas de lipoxigenases das sementes não são fatores determinantes na formação de nódulos e na fixação de nitrogênio. Utilizando-se as linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, foram avaliados os valores de Km, atividade e `immunoblotting`de lipoxigenases em raízes coletadas a 0,2,6,10,15 e 25 dias após emergência e em nódulos coletados a 10,15 e 25 dias após emergência. Os valores de Km app para raiz e para nódulo de Doko triplo nula indicaram que a eliminação genética das lipoxigenases das sementes não afetou a expressão das lipoxigenases nestes órgãos. Os valores de Km app para nódulo sugerem que o `pool` de lipoxigenases expresso neste órgão e o mesmo nestas duas linhagens no período estudado. A atividade de lipoxigenases nas raízes das linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, declinou com o passar do tempo. A maior atividade de lipoxigenases no ínicio de formação de raiz, sugere o envolvimento desta enzima no crescimento e desenvolvimento deste órgão. Contudo, para nódulo ocorreu um aumento acentuado na atividade de lipoxigenase aos 25 dias após emergência, em um estádio de desenvolvimento no qual tem-se baixa taxa de crescimento e alta taxa de fixação de nitrogênio, sugerindo que lipoxigenase expressa no nódulo estaria envolvida com o armazenamento de nitrogênio. Dois grupos de mobilidade com aproximadamente 94 e 97 KDa foram encontrados nos `immunoblottings`para lipoxigenases de raiz e de nódulo. A intensidade das bandas imuno-reativas em raiz e em nódulo confirmaram os resultados obtidos com atividade de lipoxigenase, sugerindo que as variações de atividade desta enzima nestes órgãos são, principalmente, devido as variações no teor desta enzima. Utilizando-se dois `primers` específicos para amplificar prováveis fragmentos de PCR de lipoxigenase, a partir de cDNA de nódulo e de raiz de plantas de soja da variedade Doko, obteve-se uma amplificação diferencial, indicando a expressão de, pelo menos, uma forma distinta de lipoxigenase na raiz, não expressa no nódulo. Um fragmento de PCR proveniente de cDNA do nódulo foi clonado e seqüenciado. A seqüência de aminoácidos deste clone, revelou ser proveniente de um novo membro da família multigênica de lipoxigenase de soja, com possível envolvimento no armazenamento temporário de nitrogênio. Soybean lines lacking seed lipoxygenases (triple null) were compared with the elite commercial varieties that originated them in relation to nodulation capacity and nitrogen fixation. The results indicate that seeds lipoxygenases isozymes are not decisive factors for nodulation and nitrogen fixation. Doko and Doko triple null lines, inoculated and not inoculated, were used. The lipoxygenases values of KM app, activity and immunoblotting from roots collected 0,2,6,10,15 and 25 days after emergency and from nodules collected 10,15 and 25 days emergency were measured. The KM app values of root and nodule Doko and Doko triple null lines indicated that the genetic elimination of seed lipoxygenases did not affect the lipoxygenases expression in this organ. The nodule KM app values suggest that the lipoxygenases pool expressed en this organ is the same en theses two lines during the studied period. The root lipoxygenases activity of Doko end Doko triple null lines, inoculated and not inoculated, reduced with time. The largest lipoxygenases activity observed at the beginning of root formation suggests the involvement of this enzyme in growth and development of this organ. However, for nodules it was noticed an accentuated increase of lipoxygenase activity at 25 days after plant emergency. At this development stage the nodule has slow growth's rate and high nitrogen fixation rate, suggesting that this lipoxygenase could be involved with storage of nitrogen. Root and nodule showed, at least, two mobility groups for lipoxygenases in immunoblottings, with approximately 94 and 97 Kda. The root and nodule immunoreactive bands intensity confirmed the results obtained with lipoxygenase activity, suggesting changes in these organs are mainly due variations concentrations. Two specific primers were used to amplify possible lipoxygenase DNA fragments from nodule and root cDNAs of Doko variety. It was observed a differential amplification in these two organs. At least a major form of lipoxygenase expressed in the root was not expressed in the nodule. A PCR fragment from nodule with approximately 400 bp was cloned and sequenced, resulting in a 353 bp sequence. The amino acids derived sequence of this cDNA clone, GmLOXN, were compared with others in then GenBank reavaling to be a new form lipoxygenase gene with possible role in temporary nitrogen storage. MenosLinhagens de soja triplo nulas (desprovidas das lipoxigenases da semente) foram comparadas com as variedades comerciais elite que lhe deram origem quanto a capacidade de nodulação e fixação de nitrogênio. Os resultados indicaram que as isoenzimas de lipoxigenases das sementes não são fatores determinantes na formação de nódulos e na fixação de nitrogênio. Utilizando-se as linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, foram avaliados os valores de Km, atividade e `immunoblotting`de lipoxigenases em raízes coletadas a 0,2,6,10,15 e 25 dias após emergência e em nódulos coletados a 10,15 e 25 dias após emergência. Os valores de Km app para raiz e para nódulo de Doko triplo nula indicaram que a eliminação genética das lipoxigenases das sementes não afetou a expressão das lipoxigenases nestes órgãos. Os valores de Km app para nódulo sugerem que o `pool` de lipoxigenases expresso neste órgão e o mesmo nestas duas linhagens no período estudado. A atividade de lipoxigenases nas raízes das linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, declinou com o passar do tempo. A maior atividade de lipoxigenases no ínicio de formação de raiz, sugere o envolvimento desta enzima no crescimento e desenvolvimento deste órgão. Contudo, para nódulo ocorreu um aumento acentuado na atividade de lipoxigenase aos 25 dias após emergência, em um estádio de desenvolvimento no qual tem-se baixa taxa de crescimento e alta taxa de fixação de nitrogênio, sugerindo... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
BNF; FBN; Fixacao biologica de nitrogenio; Nitrogen fixing bacteria; Root nodulation. |
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Thesagro: |
Nodulação; Soja. |
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Thesaurus Nal: |
soybeans. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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Marc: |
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260 $a2000. 97f. Tese (Doutorado em Fisiologia vegetal). Universidade Federal de Vicosa, Vicosa, Minas Gerais.$c2000
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520 $aLinhagens de soja triplo nulas (desprovidas das lipoxigenases da semente) foram comparadas com as variedades comerciais elite que lhe deram origem quanto a capacidade de nodulação e fixação de nitrogênio. Os resultados indicaram que as isoenzimas de lipoxigenases das sementes não são fatores determinantes na formação de nódulos e na fixação de nitrogênio. Utilizando-se as linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, foram avaliados os valores de Km, atividade e `immunoblotting`de lipoxigenases em raízes coletadas a 0,2,6,10,15 e 25 dias após emergência e em nódulos coletados a 10,15 e 25 dias após emergência. Os valores de Km app para raiz e para nódulo de Doko triplo nula indicaram que a eliminação genética das lipoxigenases das sementes não afetou a expressão das lipoxigenases nestes órgãos. Os valores de Km app para nódulo sugerem que o `pool` de lipoxigenases expresso neste órgão e o mesmo nestas duas linhagens no período estudado. A atividade de lipoxigenases nas raízes das linhagens Doko normal e Doko triplo nula, inoculadas e não inoculadas, declinou com o passar do tempo. A maior atividade de lipoxigenases no ínicio de formação de raiz, sugere o envolvimento desta enzima no crescimento e desenvolvimento deste órgão. Contudo, para nódulo ocorreu um aumento acentuado na atividade de lipoxigenase aos 25 dias após emergência, em um estádio de desenvolvimento no qual tem-se baixa taxa de crescimento e alta taxa de fixação de nitrogênio, sugerindo que lipoxigenase expressa no nódulo estaria envolvida com o armazenamento de nitrogênio. Dois grupos de mobilidade com aproximadamente 94 e 97 KDa foram encontrados nos `immunoblottings`para lipoxigenases de raiz e de nódulo. A intensidade das bandas imuno-reativas em raiz e em nódulo confirmaram os resultados obtidos com atividade de lipoxigenase, sugerindo que as variações de atividade desta enzima nestes órgãos são, principalmente, devido as variações no teor desta enzima. Utilizando-se dois `primers` específicos para amplificar prováveis fragmentos de PCR de lipoxigenase, a partir de cDNA de nódulo e de raiz de plantas de soja da variedade Doko, obteve-se uma amplificação diferencial, indicando a expressão de, pelo menos, uma forma distinta de lipoxigenase na raiz, não expressa no nódulo. Um fragmento de PCR proveniente de cDNA do nódulo foi clonado e seqüenciado. A seqüência de aminoácidos deste clone, revelou ser proveniente de um novo membro da família multigênica de lipoxigenase de soja, com possível envolvimento no armazenamento temporário de nitrogênio. Soybean lines lacking seed lipoxygenases (triple null) were compared with the elite commercial varieties that originated them in relation to nodulation capacity and nitrogen fixation. The results indicate that seeds lipoxygenases isozymes are not decisive factors for nodulation and nitrogen fixation. Doko and Doko triple null lines, inoculated and not inoculated, were used. The lipoxygenases values of KM app, activity and immunoblotting from roots collected 0,2,6,10,15 and 25 days after emergency and from nodules collected 10,15 and 25 days emergency were measured. The KM app values of root and nodule Doko and Doko triple null lines indicated that the genetic elimination of seed lipoxygenases did not affect the lipoxygenases expression in this organ. The nodule KM app values suggest that the lipoxygenases pool expressed en this organ is the same en theses two lines during the studied period. The root lipoxygenases activity of Doko end Doko triple null lines, inoculated and not inoculated, reduced with time. The largest lipoxygenases activity observed at the beginning of root formation suggests the involvement of this enzyme in growth and development of this organ. However, for nodules it was noticed an accentuated increase of lipoxygenase activity at 25 days after plant emergency. At this development stage the nodule has slow growth's rate and high nitrogen fixation rate, suggesting that this lipoxygenase could be involved with storage of nitrogen. Root and nodule showed, at least, two mobility groups for lipoxygenases in immunoblottings, with approximately 94 and 97 Kda. The root and nodule immunoreactive bands intensity confirmed the results obtained with lipoxygenase activity, suggesting changes in these organs are mainly due variations concentrations. Two specific primers were used to amplify possible lipoxygenase DNA fragments from nodule and root cDNAs of Doko variety. It was observed a differential amplification in these two organs. At least a major form of lipoxygenase expressed in the root was not expressed in the nodule. A PCR fragment from nodule with approximately 400 bp was cloned and sequenced, resulting in a 353 bp sequence. The amino acids derived sequence of this cDNA clone, GmLOXN, were compared with others in then GenBank reavaling to be a new form lipoxygenase gene with possible role in temporary nitrogen storage.
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Embrapa Agrobiologia (CNPAB) |
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