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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia; Embrapa Soja. |
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Data corrente: |
14/10/2024 |
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Data da última atualização: |
14/10/2024 |
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Tipo da produção científica: |
Artigo em Periódico Indexado |
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Autoria: |
ROSA, J. da; VIANA, A. J. C.; FERREIRA, F. R. A.; KOLTUN, A.; MERTZ-HENNING, L. M.; MARIN, S. R. R.; RECH FILHO, E. L.; NEPOMUCENO, A. L. |
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Afiliação: |
JULIANA DA ROSA, LONDRINA STATE UNIVERSITY; AMÉRICO JOSÉ CARVALHO VIANA; FERNANDO RAFAEL ALVES FERREIRA; ALESSANDRA KOLTUN; LILIANE MARCIA MERTZ HENNING, CNPSO; SILVANA REGINA ROCKENBACH MARIN, CNPSO; ELIBIO LEOPOLDO RECH FILHO, CENARGEN; ALEXANDRE LIMA NEPOMUCENO, CNPSO. |
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Título: |
Optimizing dsRNA engineering strategies and production in E. coli HT115 (DE3). |
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Ano de publicação: |
2024 |
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Fonte/Imprenta: |
Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, v. 51, kuae028, 2024. |
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DOI: |
https://doi.org/10.1093/jimb/kuae028 |
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Idioma: |
Inglês |
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Notas: |
Na publicação: Elibio Leopoldo Rech. |
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Conteúdo: |
Producing double-stranded RNA (dsRNA) represents a bottleneck for the adoption of RNA interference technology in agriculture, and the main hurdles are related to increases in dsRNA yield, production efficiency, and purity. Therefore, this study aimed to optimize dsRNA production in E. coli HT115 (DE3) using an in vivo system. To this end, we designed a new vector, pCloneVR_2, which resulted in the efficient production of dsRNA in E. coli HT115 (DE3). We performed optimizations in the culture medium and expression inducer in the fermentation of E. coli HT115 (DE3) for the production of dsRNA. Notably, the variable that had the greatest effect on dsRNA yield was cultivation in TB medium, which resulted in a 118% increase in yield. Furthermore, lactose induction (6 g/L) yielded 10 times more than IPTG. Additionally, our optimized up-scaled protocol of the TRIzol™ extraction method was efficient for obtaining high-quality and pure dsRNA. Finally, our optimized protocol achieved an average yield of 53.3 µg/mL after the production and purification of different dsRNAs, reducing production costs by 72%. |
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Palavras-Chave: |
Bacterial dsRNA production; Lactose induction; RNAi. |
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Thesaurus Nal: |
Double-stranded RNA. |
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Categoria do assunto: |
--
X Pesquisa, Tecnologia e Engenharia |
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Marc: |
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005 2024-10-14
008 2024 bl uuuu u00u1 u #d
024 7 $ahttps://doi.org/10.1093/jimb/kuae028$2DOI
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260 $c2024
500 $aNa publicação: Elibio Leopoldo Rech.
520 $aProducing double-stranded RNA (dsRNA) represents a bottleneck for the adoption of RNA interference technology in agriculture, and the main hurdles are related to increases in dsRNA yield, production efficiency, and purity. Therefore, this study aimed to optimize dsRNA production in E. coli HT115 (DE3) using an in vivo system. To this end, we designed a new vector, pCloneVR_2, which resulted in the efficient production of dsRNA in E. coli HT115 (DE3). We performed optimizations in the culture medium and expression inducer in the fermentation of E. coli HT115 (DE3) for the production of dsRNA. Notably, the variable that had the greatest effect on dsRNA yield was cultivation in TB medium, which resulted in a 118% increase in yield. Furthermore, lactose induction (6 g/L) yielded 10 times more than IPTG. Additionally, our optimized up-scaled protocol of the TRIzol™ extraction method was efficient for obtaining high-quality and pure dsRNA. Finally, our optimized protocol achieved an average yield of 53.3 µg/mL after the production and purification of different dsRNAs, reducing production costs by 72%.
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700 1 $aNEPOMUCENO, A. L.
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Registro original: |
Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN) |
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| Registros recuperados : 12 | |
| 1. |  | SICHERLE, C. C.; MAIA, M. da S.; BICUDO, S. D.; GREEN, R. E.; AZEVEDO, H. C. The effect of the addition of seminal plasma and antioxidants to frozen thawed ram semen. Reproduction in Domestic Animals, v. 43, n. 3, p. 170, 2008. Supplement, ref. P432. Edição dos Abstracts do 16. International Congress on Animal Reproduction, Budapest, jul. 2008.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Semiárido; Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 6. | | MAIA, M. S.; BICUDO, S. D.; AZEVEDO, H. C.; SICHERLE, C. C; SOUSA, D. B.; RODELLO, L. Geração de metabólitos reativos do oxigênio (ROS) em diluentes para a criopreservação de sêmen. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL, 17., 2007, . Anais... Belo Horizonte: CBRA, 2007. p. 198| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 7. | | AZEVEDO, H. C.; BICUDO, S. D.; MAIA, M. da S.; SOUSA, D. B.; RODELLO, L.; SICHERLE, C. C. Influência da crioresistência da membrana plasmática sobre a avaliação computadorizada da motilidade de espermatozóides ovinos criopreservados. In: SIMPÓSIO INTERNACIONAL SOBRE CAPRINOS E OVINOS DE CORTE, 3., 2007, João Pessoa. Anais... João Pessoa, 2007. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 9. | | SOUSA, D. B.; BICUDO, S. D.; MANZATO, A. J.; AZEVEDO, H. C.; MAIA, M. S.; RODELLO, L.; SICHERLE, C. C. Ranqueamento qualitativo do sêmen congelado de carneiros através da análise estatística multivariada avaliado pelo sistema Casa e sondas fluorescentes. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL, 17., 2007, Curitiba. Anais... Belo Horizonte: CBRA, 2007. p. 148.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso / Nota Técnica |
| Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 10. | | AZEVEDO, H. C.; BICUDO, S. D.; SOUSA, D. B.; MAIA, M. da S.; RODELLO, L.; SICHERLE, C. C. Measurement of sperm capacitation and acrosome reaction - like changes by chlortetracycline test (CTC) can predict the freezability of ram semen? Reproduction in Domestic Animals, Berlin, v. 43, n. 3, p. 70, 2008. Supplement 3, ref. P128. Edição dos Abstracts do 16. International Congress on Animal Reproduction, Budapest, jul. 2008.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: Internacional - A |
| Biblioteca(s): Embrapa Semiárido. |
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| 11. | | AZEVEDO, H. C.; BICUDO, S D.; SOUSA, D. B.; MAIA, M. S.; RODELLO, L.; SICHERLE, C. C. Measurement of sperm capacitation and acrosome reaction - like changes by chlortetracycline test (CTC) can predict the freezability of ram semen? In: INTERNATIONAL CONGRESS ON ANIMAL REPRODUCTION, 16., 2008, Budapest. Abstracts... European Society for Domestic Animal Reproduction, 2008. Resumo em anais.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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| 12. | | MAIA, M. da S.; BICUDO, S. D.; AZEVEDO, H. C.; SICHERLE, C. C.; SOUSA, D. B. de; RODELLO, L. Motility and viability of ram sperm cryopreserved in a Tris-egg yolk extender supplemented with anti-oxidants. Small Ruminant Research, Ney Yourk, v. 85, p. 85-90, 2009. Artigo de periódico.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 2 |
| Biblioteca(s): Embrapa Semiárido; Embrapa Tabuleiros Costeiros. |
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