Data/hora: 17/06/2024 08:07:37

Biblioteca(s): | Embrapa Cerrados; Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.
Data corrente: | 18/08/2014
Data da última atualização: | 12/12/2023
Autoria: | GUIMARÃES, A. L. S.
Título: | Avaliação de diferentes sistemas de maturação para aumentar a competência de ovócitos bovinos.
Ano de publicação: | 2013
Fonte/Imprenta: | 2013.
Páginas: | 85 f.
Idioma: | Português
Notas: | Dissertação (Mestrado) - Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientadora: Margot Alves Nunes Dode, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.
Conteúdo: | O sucesso da utilização da maioria das técnicas de reprodução assistida (TRA) depende da disponibilidade de ovócitos saudáveis e no estágio adequado para seu uso. Como um dos fatores limitantes na utilização das TRAs é a disponibilidade de ovócitos competentes, é importante buscar alternativas para auxiliar esses ovócitos melhorando com isso a eficiência dessas técnicas. O objetivo deste trabalho foi testar dois diferentes sistemas de maturação, o sistema SPOM (Simulated Physiological Oocyte Maturation) e a retenção meiótica na presença de ITS (Insulina-transferrina-Selênio), para aumentar a competência do ovócito e consequentemente incrementar a produção de embriões in vitro. Os ovócitos foram obtidos de ovários de abatedouro, sendo que os provenientes de folículos de 1-3 mm foram dissecados da córtex ovariana e os de 3-8 mm, obtidos por punção folicular. Para a avaliação dos estágios de maturação nuclear, os ovócitos foram corados com lacmóide e para verificar o efeito dos sistemas de MIV na produção de embriões, foi avaliada a taxa de clivagem, blastocisto, tamanho dos embriões e número total de células. O corante azul de Trypan foi utilizado para verificar a viabilidade das células do cumulus após a retenção. Os dados de taxa de maturação nuclear e desenvolvimento embrionário foram avaliados pelo teste do ? 2 , e os dados referentes a tamanho e número de células pelo teste de Kruskar-Wallis. O primeiro sistema de maturação a ser testado foi o sistema SPOM em ovócitos de folículos aspirados, com a dose 0,01 UI/ml de FSH, utilizada na MIV convencional, onde as taxas de clivagem, D7 e D8 foram drasticamente reduzidas (P<0,05) quando comparadas com as do grupo controle. O aumento da dose de FSH para 0,1 UI/ml, no sistema SPOM, em ovócitos obtidos de folículos de 1-3 mm não aumentou a produção de embriões (P0<0,05), entretanto em ovócitos obtidos de folículos de 3-6 mm teve efeito prejudicial, sendo as taxas de clivagem e blastocistos inferiores (P<0,05) as do grupo controle Da mesma forma, quando o SPOM foi utilizado na presença de FSH recombinante (FRSr), de BSA como suplemento dos meios e o cultivo realizado sob baixa tensão de O2, uma redução (P<0,05) na taxa de blastocisto foi observada, mas o tamanho e número de células dos embriões foram semelhantes (P>0,05) aos do controle. A segunda alternativa testada foi o uso da cilostamida, inibidor da PDE3, e ITS no cultivo de pré-maturação por 8 e 24 horas. Na concentração de 20µM, a cilostamida reteve 91% dos ovócitos em VG por até 24 horas, entretanto o desenvolvimento embrionário destes embriões foi comprometido, com baixas taxas de clivagem e de embriões em D7 (P<0,05). Foi também avaliada a diminuição da concentração de cilostamida durante o bloqueio e a presença do ITS. Foi observado que a redução da concentração de cilostamida associada ao período menor de retenção causou um aumento da produção de blastocisto semelhante às taxas obtidas para o controle e que o ITS não afetou (P>0,05) à resposta dos ovócitos a retenção com cilostamida. Conclui-se que o sistema SPOM utilizando FSHr, BSA e baixa tensão de O2 afetou o desenvolvimento embrionário. Além disso, a cilostamida quando utilizada para bloquear a meiose tem efeito deletério nos ovócitos e células do cumulus se utilizada por 24 horas na concentração de 20 ?M. A menor concentração (10?M) e menor tempo de exposição (8 horas) pode amenizar esse efeito, mas também não causa nenhum incremento na produção de embriões. A presença de ITS durante o bloqueio não afeta a produção de embriões. Mais estudos devem ser realizados na tentativa de utilizar a retenção para incrementar a qualidade de ovócitos utilizados para as TRAs.
Palavras-Chave: | Cilostamida; Cultivo de pré-maturação; Retenção meiótica; SPOM.
Categoria do assunto: | --
Registro original: | Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN)

Exemplares:

CENARGEN - (35041-1) - UPA - TS - DD - 2014.004 - GUI - 2014.004 - DIS
CPAC - (34183-1) - ADD - TS - PP - TS005/2013 -  - 005/2013 - DIS